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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助质粒的构建问题
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周志惠

新虫 (小有名气)

[求助] 求助质粒的构建问题

最近在构建质粒，出现了奇怪的问题，连接前跑电泳，载体和片段的大小都是对的，挑转化子，提质粒，质粒的大小是比对照大的，但是在进行酶切验证时，用原来连接的酶进行酶切，发现酶切下来的片段比目的片段小几百bp？想请教这是什么原因？怎么样解决这一问题？（是双酶切）
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1楼 2012-12-30 15:31:50
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freerain

禁虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
周志惠: 金币+5, ★有帮助 2012-12-31 13:36:37
本帖内容被屏蔽
2楼2012-12-30 15:48:15
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
周志惠: 金币+5, ★有帮助 2012-12-31 13:38:29
可能连接的不是你的序列，测序看一下吧，别纠结这个问题了，挑到真的接着做就好了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2012-12-30 15:50:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
周志惠: 金币+10, ★有帮助 2012-12-31 13:39:12
有时候片段在胶上看起来会有点小，送样品测序看看吧。当然也有可能是克隆的片段不对。
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4楼2012-12-30 16:08:19
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周志惠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by freerain at 2012-12-30 15:48:15
看看内部是不是有酶切位点
或者测序看看序列对不对

谢谢解答哦，关键是实验室不方便测序
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5楼2012-12-31 13:38:02
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周志惠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-12-30 15:50:02
可能连接的不是你的序列，测序看一下吧，别纠结这个问题了，挑到真的接着做就好了。

谢谢回答，关键就是挑出来的转化子所连的片段都是比目的片段小的
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6楼2012-12-31 13:39:02
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周志惠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-30 16:08:19
有时候片段在胶上看起来会有点小，送样品测序看看吧。当然也有可能是克隆的片段不对。

7楼2012-12-31 13:39:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 周志惠 at 2012-12-31 13:38:02
谢谢解答哦，关键是实验室不方便测序...

送到公司测序也不贵的。
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8楼2012-12-31 16:53:52
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xjtao99

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
9楼2013-01-02 15:03:41
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周志惠

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xjtao99 at 2013-01-02 15:03:41
你可以做pcr验证一下，能扩增出来你的目的片段以后再做酶切验证

我现在 是想知道为什么会出现这种情况，这小片段是怎么连上去的
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10楼2013-01-02 15:30:21
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