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周志惠

新虫 (小有名气)

[求助] 求助质粒的构建问题

最近在构建质粒,出现了奇怪的问题,连接前跑电泳,载体和片段的大小都是对的,挑转化子,提质粒,质粒的大小是比对照大的,但是在进行酶切验证时,用原来连接的酶进行酶切,发现酶切下来的片段比目的片段小几百bp?想请教这是什么原因?怎么样解决这一问题?(是双酶切)
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freerain

禁虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
周志惠: 金币+5, 有帮助 2012-12-31 13:36:37
本帖内容被屏蔽

2楼2012-12-30 15:48:15
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
周志惠: 金币+5, 有帮助 2012-12-31 13:38:29
可能连接的不是你的序列,测序看一下吧,别纠结这个问题了,挑到真的接着做就好了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-12-30 15:50:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
周志惠: 金币+10, 有帮助 2012-12-31 13:39:12
有时候片段在胶上看起来会有点小,送样品测序看看吧。当然也有可能是克隆的片段不对。
4楼2012-12-30 16:08:19
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周志惠

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by freerain at 2012-12-30 15:48:15
看看内部是不是有酶切位点
或者测序看看序列对不对

谢谢解答哦,关键是实验室不方便测序
5楼2012-12-31 13:38:02
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周志惠

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-12-30 15:50:02
可能连接的不是你的序列,测序看一下吧,别纠结这个问题了,挑到真的接着做就好了。

谢谢回答,关键就是挑出来的转化子所连的片段都是比目的片段小的
6楼2012-12-31 13:39:02
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周志惠

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-30 16:08:19
有时候片段在胶上看起来会有点小,送样品测序看看吧。当然也有可能是克隆的片段不对。

7楼2012-12-31 13:39:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 周志惠 at 2012-12-31 13:38:02
谢谢解答哦,关键是实验室不方便测序...

送到公司测序也不贵的。
8楼2012-12-31 16:53:52
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xjtao99

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

9楼2013-01-02 15:03:41
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周志惠

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by xjtao99 at 2013-01-02 15:03:41
你可以做pcr验证一下,能扩增出来你的目的片段以后再做酶切验证

我现在 是想知道为什么会出现这种情况,这小片段是怎么连上去的
10楼2013-01-02 15:30:21
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