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克隆引物设计
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sunxin2012
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克隆引物设计
已知目的基因的序列,想把它完整的克隆出来,谁能帮忙回答一下要怎样设计引物?详细一点。谢谢
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1楼
2012-12-29 22:04:39
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sunxin2012
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3楼
:
Originally posted by
shujunru
at 2013-01-02 15:03:52
首先,要明确你的目的,是做表达,还是要做其他用途;然后要根据你的用途来设计引物,并在两端加上预设的酶切位点和相应的保护碱基,一般保护碱基为3-6个;引物大小一般是18-25个之间,调整两端引物大小,使引物退火 ...
是做表达用的。我想知道,怎么样设计引物才能把保证扩增出来的片段是完整的目的片段?
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Saveyourheartforsomeonewhocares.把心留给在乎你的人吧。
5楼
2013-01-03 17:42:30
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世界上只有一种真正的英雄主义,那就是看清生活的真相之后,依然热爱生活。
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2013-01-02 13:11:03
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shujunru
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2013-01-02 17:11:29
首先,要明确你的目的,是做表达,还是要做其他用途;然后要根据你的用途来设计引物,并在两端加上预设的酶切位点和相应的保护碱基,一般保护碱基为3-6个;引物大小一般是18-25个之间,调整两端引物大小,使引物退火温度差异在5度之内;有专门的软件来设计的
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3楼
2013-01-02 15:03:52
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meihai08
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2013-01-02 17:11:38
上面说的挺对的,已知目的基因的序列,可以按照碱基互补规则设计引物,一般18-27 bp,但不应大于38bp。然后根据需要可以在两端加上酶切位点(根据你的需要挑选)和相应的保护碱基,3-6个;接着可以用Oligo 6,Primer5等进行辅助设计。
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4楼
2013-01-02 15:48:25
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