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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆引物设计
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)

[求助] 克隆引物设计

已知目的基因的序列，想把它完整的克隆出来，谁能帮忙回答一下要怎样设计引物？详细一点。谢谢
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Saveyourheartforsomeonewhocares.把心留给在乎你的人吧。
1楼 2012-12-29 22:04:39
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小木虫刘树青

木虫 (著名写手)

夜未眠
我也想知道，新手
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世界上只有一种真正的英雄主义，那就是看清生活的真相之后，依然热爱生活。
2楼2013-01-02 13:11:03
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shujunru

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-02 17:11:29
首先，要明确你的目的，是做表达，还是要做其他用途；然后要根据你的用途来设计引物，并在两端加上预设的酶切位点和相应的保护碱基，一般保护碱基为3-6个；引物大小一般是18-25个之间，调整两端引物大小，使引物退火温度差异在5度之内；有专门的软件来设计的
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3楼2013-01-02 15:03:52
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meihai08

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-02 17:11:38
上面说的挺对的，已知目的基因的序列，可以按照碱基互补规则设计引物，一般18-27 bp，但不应大于38bp。然后根据需要可以在两端加上酶切位点（根据你的需要挑选）和相应的保护碱基，3-6个；接着可以用Oligo 6，Primer5等进行辅助设计。
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4楼2013-01-02 15:48:25
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shujunru at 2013-01-02 15:03:52
首先，要明确你的目的，是做表达，还是要做其他用途；然后要根据你的用途来设计引物，并在两端加上预设的酶切位点和相应的保护碱基，一般保护碱基为3-6个；引物大小一般是18-25个之间，调整两端引物大小，使引物退火 ...

是做表达用的。我想知道，怎么样设计引物才能把保证扩增出来的片段是完整的目的片段？
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5楼2013-01-03 17:42:30
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by meihai08 at 2013-01-02 15:48:25
上面说的挺对的，已知目的基因的序列，可以按照碱基互补规则设计引物，一般18-27 bp，但不应大于38bp。然后根据需要可以在两端加上酶切位点（根据你的需要挑选）和相应的保护碱基，3-6个；接着可以用Oligo 6，Prime ...

怎么样保证所设计的引物扩增出来的片段是完整的目的序列
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6楼2013-01-03 17:43:27
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