[交流] 【求助/交流】同源克隆设计的引物Tm值过低怎么办

Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-27 11:18:19:
Tm值的计算只考虑能够配对的部分，保护碱基一般不予考虑，酶切位点分情况。

你的引物才17bp啊，可以继续延长啊。

[ Last edited by brightfuture01 on 2011-2-27 at 11:19 ]

Originally posted by xnbioinfor at 2011-02-27 13:00:41:
引物合成清单上的Tm 难道不算保护碱基和酶切位点吗

Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-27 13:27:24:
呵呵，保护碱基在退火的时候会和模板结合么？

不结合当然不算了。

Originally posted by xnbioinfor at 2011-02-27 13:33:22:
扩增几个循环以后，不是保护碱基和酶切位点都互补了吗

Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-27 13:36:41:
呵呵，那你一开始的时候退火温度设置过高，岂非你的引物跟模板都不能结合？

Originally posted by xnbioinfor at 2011-02-27 13:50:44:
一般Tm 值多少比较合适

Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-27 13:53:38:
看你是用来干嘛了，

Tm值高一般意味这引物比较长，特异性较好。所以如果在你从基因组中扩基因的话，需要将Tm设置高一点，55-65都是可以的。

比如我经常做表达截断的克隆，原本就是连在载体上的，这时候载 ...

Originally posted by xnbioinfor at 2011-02-27 14:34:50:
我是克隆葡萄中一个cDNA的，引物17bp, Tm 41.1 有点低，是不是