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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】同源克隆设计的引物Tm值过低怎么办

计算Tm值是否要考虑酶切序列和保护碱基,我的引物Tm值过低,怎么想办法提高呢?望指点
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xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-02-27 13:00:41:
引物合成清单上的Tm 难道不算保护碱基和酶切位点吗

呵呵,保护碱基在退火的时候会和模板结合么?

不结合当然不算了。
5楼2011-02-27 13:27:24
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xnbioinfor(金币+1): 2011-02-27 12:56:27
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-27 16:36:33
Tm值的计算只考虑能够配对的部分,保护碱基一般不予考虑,酶切位点分情况。

你的引物才17bp啊,可以继续延长啊。

[ Last edited by brightfuture01 on 2011-2-27 at 11:19 ]
2楼2011-02-27 11:18:19
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-27 11:18:19:
Tm值的计算只考虑能够配对的部分,保护碱基一般不予考虑,酶切位点分情况。

你的引物才17bp啊,可以继续延长啊。

[ Last edited by brightfuture01 on 2011-2-27 at 11:19 ]

引物合成清单上的Tm 难道不算保护碱基和酶切位点吗
3楼2011-02-27 13:00:41
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-27 13:27:24:
呵呵,保护碱基在退火的时候会和模板结合么?

不结合当然不算了。

扩增几个循环以后,不是保护碱基和酶切位点都互补了吗
6楼2011-02-27 13:33:22
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