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sunxin2012

铜虫 (小有名气)

[求助] 克隆引物设计

已知目的基因的序列,想把它完整的克隆出来,谁能帮忙回答一下要怎样设计引物?详细一点。谢谢
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Saveyourheartforsomeonewhocares.把心留给在乎你的人吧。
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shujunru

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-02 17:11:29
首先,要明确你的目的,是做表达,还是要做其他用途;然后要根据你的用途来设计引物,并在两端加上预设的酶切位点和相应的保护碱基,一般保护碱基为3-6个;引物大小一般是18-25个之间,调整两端引物大小,使引物退火温度差异在5度之内;有专门的软件来设计的
3楼2013-01-02 15:03:52
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小木虫刘树青

木虫 (著名写手)

夜未眠

我也想知道,新手
世界上只有一种真正的英雄主义,那就是看清生活的真相之后,依然热爱生活。
2楼2013-01-02 13:11:03
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meihai08

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-02 17:11:38
上面说的挺对的,已知目的基因的序列,可以按照碱基互补规则设计引物,一般18-27 bp,但不应大于38bp。然后根据需要可以在两端加上酶切位点(根据你的需要挑选)和相应的保护碱基,3-6个;接着可以用Oligo 6,Primer5等进行辅助设计。
4楼2013-01-02 15:48:25
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by shujunru at 2013-01-02 15:03:52
首先,要明确你的目的,是做表达,还是要做其他用途;然后要根据你的用途来设计引物,并在两端加上预设的酶切位点和相应的保护碱基,一般保护碱基为3-6个;引物大小一般是18-25个之间,调整两端引物大小,使引物退火 ...

是做表达用的。我想知道,怎么样设计引物才能把保证扩增出来的片段是完整的目的片段?
Saveyourheartforsomeonewhocares.把心留给在乎你的人吧。
5楼2013-01-03 17:42:30
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