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fxj1986

木虫 (正式写手)


[交流] 酶切酶连转化后单克隆检测不对

自己构建的载体,片段7K左右;片段(3k)通过PCR扩增;电泳后回收进行酶切,酶切条件37℃,3h;再电泳后回收,酶连时载体:片段=1:1.5左右,转化DH5α,16h(氯霉素抗性)平板上单克隆很多;挑取单克隆进行菌落PCR验证(引物为自己设计),电泳结果显示除了目的条带外还有其他条带;对单克隆培养重新提取质粒进行双酶切后,只检测出一条带(与质粒大小基本一致),没有片段的目的条带。几次转化都如此,求分析,求经验!
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
酶连时载体:片段=1:1.5????我们一般是载体:片段的摩尔数=1:3~1:10.
9楼2014-03-03 17:12:03
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