应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌表达42kd的蛋白，蛋白电泳显示只有35kd，测酶活还比较高，这是怎么回事儿呢？
101/1返回列表
查看: 3384  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fanfei211923

铁虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌表达42kd的蛋白，蛋白电泳显示只有35kd，测酶活还比较高，这是怎么回事儿呢？

最近表达一个蛋白，大小约为42kd，用载体pET28(a)，转入到BL21(DE3)表达,37°C,1mMIPTG诱导后，sds-page电泳结果显示只有在35kd处有明显条带，和理论值差7KD,且条带比较深，用超声破壁测酶活，和文献相比较酶活又比较高,这是怎么回事儿呢，之前一直没有条带，重新连接、转化，才有条带竟和理论值差这么多，真是一波三折啊，希望有经验的虫友们帮小弟解决一下这个难题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-23 23:44:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-24 13:47:41
SDSPage测定蛋白质分子量不是很准，特别如果你的蛋白质有修饰，或含有大量碱性或酸性的氨基酸，或大量的疏水性残基，有大的偏差很正常。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-24 04:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)

响当当的木头

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为了确定是不是你要的蛋白，你可以做western blot鉴定一下
赞一下 回复此楼
没有梦就走，没有错就不向谁低头
3楼2012-08-24 08:49:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shxteacher

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-24 13:47:50
你可以<1>导入没有目的基因的空质粒pet28a，看是否有内源表达<2>把你的目的基因中插入终止密码子，看看是否依旧有35kda的蛋白质产生，是否酶活很高
赞一下 回复此楼
OMG
4楼2012-08-24 09:47:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-24 13:48:02
SDS-PAGE毕竟不是准确的方式，有条件的做质谱，最直观了。
还有就是看看你的蛋白是不是提前终止了。
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-24 09:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

101202139

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-25 19:45:43
首先要看看你表达的蛋白是什么类型的？我们实验室出现这样的情况，实际Kd值要比理论小，很有可能是一种糖蛋白！另外，只要你测酶活的方法是正确的，克隆也是正确的，酶活高这不是好事嘛！
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-25 10:12:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物-TJAB

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很有可能啊！理论分子量与表观分子量走了可能差那么多啊！不过还有一种可能就是你的目的基因突变，导致中间形成一个终止密码子，提前终止，导致蛋白变短却有活性。最好打质谱了！准确，放心啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-26 00:21:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

danlv

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-24 09:50:54
SDS-PAGE毕竟不是准确的方式，有条件的做质谱，最直观了。
还有就是看看你的蛋白是不是提前终止了。

蛋白翻译是否提前终止应该从DNA序列上就能看出来的吧？  除了遇到同一个ORF里的终止子还有其他可能的情况吗？
赞一下 回复此楼
8楼2012-08-26 13:39:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不用那么复杂，把插入进去的序列分析清楚，是否有信号肽，被切割之后就短了，不过信号肽貌似不应该有这么长，要么转录进去的序列不对，是截短的序列，要么表达的蛋白转录后被切割了
赞一下 回复此楼
9楼2012-08-27 14:36:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lintaosong

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我一般直接做western blot，蛋白电泳看条带不太靠谱，特别对于一些修饰蛋白！
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-02 11:57:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fanfei211923 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:23 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:50 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:17 by Xc2FxHsHkBNc
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:06 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 6/300 2026-11-07 15:44 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 23/1150 2026-11-07 06:49 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭