24小时热门版块排行榜    

查看: 2511  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fanfei211923

铁虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌表达42kd的蛋白,蛋白电泳显示只有35kd,测酶活还比较高,这是怎么回事儿呢?

最近表达一个蛋白,大小约为42kd,用载体pET28(a),转入到BL21(DE3)表达,37°C,1mMIPTG诱导后,sds-page电泳结果显示只有在35kd处有明显条带,和理论值差7KD,且条带比较深,用超声破壁测酶活,和文献相比较酶活又比较高,这是怎么回事儿呢,之前一直没有条带,重新连接、转化,才有条带竟和理论值差这么多,真是一波三折啊,希望有经验的虫友们帮小弟解决一下这个难题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lintaosong

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我一般直接做western blot,蛋白电泳看条带不太靠谱,特别对于一些修饰蛋白!
10楼2012-09-02 11:57:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-24 13:47:41
SDSPage测定蛋白质分子量不是很准,特别如果你的蛋白质有修饰,或含有大量碱性或酸性的氨基酸,或大量的疏水性残基,有大的偏差很正常。
2楼2012-08-24 04:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)

响当当的木头

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为了确定是不是你要的蛋白,你可以做western blot鉴定一下
没有梦就走,没有错就不向谁低头
3楼2012-08-24 08:49:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shxteacher

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-24 13:47:50
你可以<1>导入没有目的基因的空质粒pet28a,看是否有内源表达<2>把你的目的基因中插入终止密码子,看看是否依旧有35kda的蛋白质产生,是否酶活很高
OMG
4楼2012-08-24 09:47:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 272求调剂 +3 材紫有化 2026-02-28 3/150 2026-02-28 22:52 by ms629
[考研] 290求调剂 +5 材料专硕调剂; 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:40 by gaoxiaoniuma
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 材料学调剂 +5 提神豆沙包 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:34 by gaoxiaoniuma
[考研] 311求调剂 +8 南迦720 2026-02-28 8/400 2026-02-28 21:30 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[教师之家] 版面费该交吗 +15 苹果在哪里 2026-02-22 18/900 2026-02-28 18:20 by mibaomingg
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 272求调剂 +3 田智友 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:31 by 王加浩to
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见