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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌表达42kd的蛋白，蛋白电泳显示只有35kd，测酶活还比较高，这是怎么回事儿呢？
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fanfei211923

铁虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌表达42kd的蛋白，蛋白电泳显示只有35kd，测酶活还比较高，这是怎么回事儿呢？

最近表达一个蛋白，大小约为42kd，用载体pET28(a)，转入到BL21(DE3)表达,37°C,1mMIPTG诱导后，sds-page电泳结果显示只有在35kd处有明显条带，和理论值差7KD,且条带比较深，用超声破壁测酶活，和文献相比较酶活又比较高,这是怎么回事儿呢，之前一直没有条带，重新连接、转化，才有条带竟和理论值差这么多，真是一波三折啊，希望有经验的虫友们帮小弟解决一下这个难题。
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1楼 2012-08-23 23:44:10
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danlv

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-24 09:50:54
SDS-PAGE毕竟不是准确的方式，有条件的做质谱，最直观了。
还有就是看看你的蛋白是不是提前终止了。

蛋白翻译是否提前终止应该从DNA序列上就能看出来的吧？  除了遇到同一个ORF里的终止子还有其他可能的情况吗？
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8楼2012-08-26 13:39:25
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-24 13:47:41
SDSPage测定蛋白质分子量不是很准，特别如果你的蛋白质有修饰，或含有大量碱性或酸性的氨基酸，或大量的疏水性残基，有大的偏差很正常。
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2楼2012-08-24 04:55:21
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dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)

响当当的木头

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为了确定是不是你要的蛋白，你可以做western blot鉴定一下
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没有梦就走，没有错就不向谁低头
3楼2012-08-24 08:49:28
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shxteacher

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-24 13:47:50
你可以<1>导入没有目的基因的空质粒pet28a，看是否有内源表达<2>把你的目的基因中插入终止密码子，看看是否依旧有35kda的蛋白质产生，是否酶活很高
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OMG
4楼2012-08-24 09:47:22
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