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fanfei211923

铁虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 106.8
帖子: 8
在线: 12.1小时
虫号: 1417569
注册: 2011-09-26
专业: 抗体工程学

[求助] 大肠杆菌表达42kd的蛋白，蛋白电泳显示只有35kd，测酶活还比较高，这是怎么回事儿呢？

最近表达一个蛋白，大小约为42kd，用载体pET28(a)，转入到BL21(DE3)表达,37°C,1mMIPTG诱导后，sds-page电泳结果显示只有在35kd处有明显条带，和理论值差7KD,且条带比较深，用超声破壁测酶活，和文献相比较酶活又比较高,这是怎么回事儿呢，之前一直没有条带，重新连接、转化，才有条带竟和理论值差这么多，真是一波三折啊，希望有经验的虫友们帮小弟解决一下这个难题。

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1楼2012-08-23 23:44:10

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danlv

木虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1855.7
红花: 1
帖子: 163
在线: 176.7小时
虫号: 441090
注册: 2007-10-27
专业: 微生物遗传育种学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

引用回帖:

5楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-24 09:50:54
SDS-PAGE毕竟不是准确的方式，有条件的做质谱，最直观了。
还有就是看看你的蛋白是不是提前终止了。

蛋白翻译是否提前终止应该从DNA序列上就能看出来的吧？除了遇到同一个ORF里的终止子还有其他可能的情况吗？

8楼2012-08-26 13:39:25

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