24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2591  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fanfei211923

铁虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌表达42kd的蛋白,蛋白电泳显示只有35kd,测酶活还比较高,这是怎么回事儿呢?

最近表达一个蛋白,大小约为42kd,用载体pET28(a),转入到BL21(DE3)表达,37°C,1mMIPTG诱导后,sds-page电泳结果显示只有在35kd处有明显条带,和理论值差7KD,且条带比较深,用超声破壁测酶活,和文献相比较酶活又比较高,这是怎么回事儿呢,之前一直没有条带,重新连接、转化,才有条带竟和理论值差这么多,真是一波三折啊,希望有经验的虫友们帮小弟解决一下这个难题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不用那么复杂,把插入进去的序列分析清楚,是否有信号肽,被切割之后就短了,不过信号肽貌似不应该有这么长,要么转录进去的序列不对,是截短的序列,要么表达的蛋白转录后被切割了
9楼2012-08-27 14:36:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-24 13:47:41
SDSPage测定蛋白质分子量不是很准,特别如果你的蛋白质有修饰,或含有大量碱性或酸性的氨基酸,或大量的疏水性残基,有大的偏差很正常。
2楼2012-08-24 04:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)

响当当的木头

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为了确定是不是你要的蛋白,你可以做western blot鉴定一下
没有梦就走,没有错就不向谁低头
3楼2012-08-24 08:49:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shxteacher

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-24 13:47:50
你可以<1>导入没有目的基因的空质粒pet28a,看是否有内源表达<2>把你的目的基因中插入终止密码子,看看是否依旧有35kda的蛋白质产生,是否酶活很高
OMG
4楼2012-08-24 09:47:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工调剂 10+9 下一站上岸@ 2026-04-10 27/1350 2026-04-10 19:50 by maohaier
[考研] 309求调剂 +13 wdhw 2026-04-10 14/700 2026-04-10 16:55 by wrnwrn
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 一志愿085502,267分求调剂 +10 再忙也要吃饭啊 2026-04-08 11/550 2026-04-09 19:51 by gong120082
[考研] 材料299专硕求调剂 +10 +21 2026-04-09 10/500 2026-04-09 17:34 by 1753564080
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 复试调剂,一志愿郑州大学材料与化工289分 +31 硕星赴 2026-04-08 31/1550 2026-04-09 16:54 by Delta2012
[考研] 求调剂,现在还能填的 +3 上岸小莹加油 2026-04-08 3/150 2026-04-08 14:30 by zhq0425
[考研] 调剂 +3 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:39 by 电气300求调剂不
[考研] 283分求调剂 +14 试试看呗 2026-04-04 14/700 2026-04-08 07:03 by lijunpoly
[考研] 071000生物学,一志愿深圳大学296分,求调剂 +12 TIckLw 2026-04-06 13/650 2026-04-07 20:34 by lijunpoly
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +6 rious 2026-04-05 6/300 2026-04-07 09:42 by jp9609
[考研] 22408 331分求调剂 +4 y__1 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:26 by 土木硕士招生
[考研] 0703求调剂383分 +9 W55j 2026-04-03 9/450 2026-04-06 06:50 by houyaoxu
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 272求调剂 +4 电气李 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:41 by lbsjt
[考研] 材料调剂 +7 dxy调剂 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:15 by 陌秋26
[考研] 复试调剂 +6 范根培 2026-04-04 6/300 2026-04-04 14:27 by 土木硕士招生
信息提示
请填处理意见