应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，巢式PCR，出了点儿问题，！
141/1返回列表
查看: 2874  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)

[交流] 求助，巢式PCR，出了点儿问题，！

第一步pcr都是25微升的体系，12.5微升的premix，上下游引物都是0.5微升，模版是2微升。。。
第二步50微升体系premix，上下游引物1微升，模版2微升
哪里出问题了，难道是我的操作？
师兄做的p出来的条带很亮很好，应该不是引物设计问题吧。
为什么我做的阳性对照有条带而且非常的弱，我的样品啥都没有，郁闷啊！！！图片中阳性对照跑出来两个条带，一条亮的是我的目的条带，目的条带是592bp，弱的不知道是什么。。。


[ Last edited by 襄阳蓉儿 on 2012-7-16 at 20:30 ]
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : UVP00639July162012.tif
    • 2012-07-16 20:17:51, 306.81 K

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-07-15 15:39:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqzhu1998

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-15 19:46:10
是不是写错了？？12.5ul的酶？？
第二步的体系可以放大，做75或100
慢慢来，多看看师兄做的，自己再多琢磨琢磨，细心一点，肯定能做出来的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-15 16:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我以前也做过巢式PCR，一般很容易出结果的，你肯定是中间出了问题，我建议，你第一步先跑胶看一下，如果第1步啥都没有，那第2步就不好说
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-16 08:43:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
妹子长的不错嘛
回复此楼
4楼2012-07-16 08:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-16 08:43:51
我以前也做过巢式PCR，一般很容易出结果的，你肯定是中间出了问题，我建议，你第一步先跑胶看一下，如果第1步啥都没有，那第2步就不好说

我问了师兄也自己查了相关资料，第一步没有条带是正常的吧？
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-16 09:15:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

倾听世界0721

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第二次可以做到50ul，把引物、dNTP的量增加一倍。
赞一下 回复此楼
6楼2012-07-16 10:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chan_6217911

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有可能是第二步PCR的模板量（你用的是2ul）太多了，你可以用0.5ul或者稀释一定倍数。
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-16 12:10:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xudabin98

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
额滴神啊,你是用的什么酶啊?要用那么大的量,P不出来应该是正常的.第一步PCR结果电泳也看不出啥来.你对招标准PROTOCOL多看看.
赞一下 回复此楼
8楼2012-07-16 12:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xudabin98 at 2012-07-16 12:39:36
额滴神啊,你是用的什么酶啊?要用那么大的量,P不出来应该是正常的.第一步PCR结果电泳也看不出啥来.你对招标准PROTOCOL多看看.

说错了，那个是Premix
赞一下 回复此楼
9楼2012-07-16 15:41:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)
襄阳蓉儿: 回帖置顶 2012-07-16 20:14:55
阳性对照跑出来两个条带，一条亮的是我的目的条带，弱的不知道是什么。。。啥玩意儿啊
赞一下 回复此楼
10楼2012-07-16 20:13:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 襄阳蓉儿 at 2012-07-16 09:15:37
我问了师兄也自己查了相关资料，第一步没有条带是正常的吧？...

我觉得不太正常，以前我做的时候，第1次一般都会有些弥散带，所以我觉得你第1轮是不是就没扩增好，或者你第1轮的PCR降低一下退火温度，第2轮再提高一下退火温度试试
赞一下 回复此楼
11楼2012-07-16 21:28:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-16 08:43:51
我以前也做过巢式PCR，一般很容易出结果的，你肯定是中间出了问题，我建议，你第一步先跑胶看一下，如果第1步啥都没有，那第2步就不好说

您好，我做巢式PCR做了一周多了，用特异性引物和此模板可以扩增出来，第一轮一直没有东西，第二轮也没有东西。退火温度和模板梯度都做了，但是还是不行。可能原因有哪些呢？
赞一下 回复此楼
12楼2013-05-16 21:56:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by xudabin98 at 2012-07-16 12:39:36
额滴神啊,你是用的什么酶啊?要用那么大的量,P不出来应该是正常的.第一步PCR结果电泳也看不出啥来.你对招标准PROTOCOL多看看.

您好，我做巢式PCR做了一周多了，用特异性引物和此模板可以扩增出来，第一轮一直没有东西，第二轮也没有东西。退火温度和模板梯度都做了，但是还是不行。可能原因有哪些呢？
赞一下 回复此楼
13楼2013-05-16 22:04:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-16 21:28:23
我觉得不太正常，以前我做的时候，第1次一般都会有些弥散带，所以我觉得你第1轮是不是就没扩增好，或者你第1轮的PCR降低一下退火温度，第2轮再提高一下退火温度试试...

您好，我做巢式PCR做了一周多了，用特异性引物和此模板可以扩增出来，第一轮一直没有东西，第二轮也没有东西。退火温度和模板梯度都做了，但是还是不行。可能原因有哪些呢？
赞一下 回复此楼
14楼2013-05-16 22:06:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 襄阳蓉儿 的主题更新
141/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290求调剂 +4 ^O^乜 2026-03-19 4/200 2026-03-20 11:51 by 学员8dgXkO
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +3 lemonzzn 2026-03-17 4/200 2026-03-20 11:04 by lemonzzn
[考研] 271材料工程求调剂 +7 .6lL 2026-03-18 7/350 2026-03-20 09:10 by xingguangj
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +3 Charlieyq 2026-03-19 3/150 2026-03-20 08:53 by xingguangj
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +8 步川酷紫123 2026-03-13 8/400 2026-03-20 08:47 by xingguangj
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +14 陌の森林 2026-03-18 14/700 2026-03-19 22:38 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +12 曦熙兮 2026-03-15 12/600 2026-03-19 19:42 by maocaozhuxi
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 6/300 2026-03-19 17:18 by fei626-918
[教师之家] 焦虑 +9 水冰月月野兔 2026-03-13 13/650 2026-03-19 09:50 by otani
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭