应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，巢式PCR，出了点儿问题，！
51/1返回列表
查看: 2810  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)

[交流] 求助，巢式PCR，出了点儿问题，！

第一步pcr都是25微升的体系，12.5微升的premix，上下游引物都是0.5微升，模版是2微升。。。
第二步50微升体系premix，上下游引物1微升，模版2微升
哪里出问题了，难道是我的操作？
师兄做的p出来的条带很亮很好，应该不是引物设计问题吧。
为什么我做的阳性对照有条带而且非常的弱，我的样品啥都没有，郁闷啊！！！图片中阳性对照跑出来两个条带，一条亮的是我的目的条带，目的条带是592bp，弱的不知道是什么。。。


[ Last edited by 襄阳蓉儿 on 2012-7-16 at 20:30 ]
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : UVP00639July162012.tif
    • 2012-07-16 20:17:51, 306.81 K

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-07-15 15:39:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-16 08:43:51
我以前也做过巢式PCR，一般很容易出结果的，你肯定是中间出了问题，我建议，你第一步先跑胶看一下，如果第1步啥都没有，那第2步就不好说

您好，我做巢式PCR做了一周多了，用特异性引物和此模板可以扩增出来，第一轮一直没有东西，第二轮也没有东西。退火温度和模板梯度都做了，但是还是不行。可能原因有哪些呢？
赞一下 回复此楼
12楼2013-05-16 21:56:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

jqzhu1998

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-15 19:46:10
是不是写错了？？12.5ul的酶？？
第二步的体系可以放大，做75或100
慢慢来，多看看师兄做的，自己再多琢磨琢磨，细心一点，肯定能做出来的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-15 16:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我以前也做过巢式PCR，一般很容易出结果的，你肯定是中间出了问题，我建议，你第一步先跑胶看一下，如果第1步啥都没有，那第2步就不好说
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-16 08:43:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-16 08:43:51
我以前也做过巢式PCR，一般很容易出结果的，你肯定是中间出了问题，我建议，你第一步先跑胶看一下，如果第1步啥都没有，那第2步就不好说

我问了师兄也自己查了相关资料，第一步没有条带是正常的吧？
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-16 09:15:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭