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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题已有15人参与

跟很多人一样 做的是土壤微生物多样性
这里,我觉得有一个很大的瓶颈 就是提取基因组之后的PCR扩增问题。因为后面的所有分子水平的分析都建立在PCR 扩增的基础上。可是 我做了很久,这个扩增效果总是不理想。
在此发帖,希望做类似工作的 能够将自己在实验过程中的心得一一列举出来 不论什么因素 只要是自己觉得影响pCR 效果的 都列举出来吧,毕竟 经验这东西 还是很重要的 希望大家不吝赐教,我们一相互讨论。
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-08-30 23:19:23:
可能最主要的是你的基因组分离要干净

很多所谓的基因组纯化试剂盒由于原理的原因,回收效率比较低,如果你仅仅是用于做PCR扩增,尤其是多样性的实验,你粗提的DNA可以用玻璃珠或者超声波打断一下,然后再过纯化 ...

还是杂质干扰的问题,我们也觉得是这个引起的因为 图让个中粗提的dna 就就是很脏,颜色很明显褐红色,如果要纯化的话  不论是胶回收还是别的什么办法 损失是肯定有的。目前做多样性我觉得这是一个很大的瓶颈,就是为了要DNA 量大 才不想用试剂盒,后面却步好做  谢谢你的提醒
8楼2011-08-31 12:19:22
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

希望做这块的虫子们 都能出来交流交流
2楼2011-08-30 14:20:59
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

就真的没有人愿意出来交流一下吗
3楼2011-08-30 19:36:40
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翰章

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-08-31 07:40:41
主要是无菌操作;Tm值的确定及时间的确定,以及延伸时间的确定;可以做模板浓度梯度和Tm温度梯度,希望你实验顺利。
4楼2011-08-30 22:40:48
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