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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题 已有15人参与

跟很多人一样 做的是土壤微生物多样性
这里，我觉得有一个很大的瓶颈 就是提取基因组之后的PCR扩增问题。因为后面的所有分子水平的分析都建立在PCR 扩增的基础上。可是 我做了很久，这个扩增效果总是不理想。
在此发帖，希望做类似工作的 能够将自己在实验过程中的心得一一列举出来 不论什么因素 只要是自己觉得影响pCR 效果的 都列举出来吧，毕竟 经验这东西 还是很重要的 希望大家不吝赐教，我们一相互讨论。
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1楼 2011-08-29 20:35:13
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quiller2000

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-08-31 07:40:49
可能最主要的是你的基因组分离要干净

很多所谓的基因组纯化试剂盒由于原理的原因，回收效率比较低，如果你仅仅是用于做PCR扩增，尤其是多样性的实验，你粗提的DNA可以用玻璃珠或者超声波打断一下，然后再过纯化的柱子，这样回收率会高一些，从而使得你后续的PCR会容易一些！

可能说的不对，这个没有搞过，呵呵！
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致良知
5楼2011-08-30 23:19:23
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
希望做这块的虫子们 都能出来交流交流
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2楼2011-08-30 14:20:59
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
就真的没有人愿意出来交流一下吗
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3楼2011-08-30 19:36:40
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翰章

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-08-31 07:40:41
主要是无菌操作；Tm值的确定及时间的确定，以及延伸时间的确定；可以做模板浓度梯度和Tm温度梯度，希望你实验顺利。
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4楼2011-08-30 22:40:48
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