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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转化子质粒为什么无法提取出来
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jackiechan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】转化子质粒为什么无法提取出来 已有4人参与

请问为什么我把一个基因用pet28a转入e.coli k-12，但在转化子中无法提取质粒呢？转化子能在卡那的lb培养基中生长，而未转化的e.coli k-12不能生长。谢谢
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1楼 2010-04-23 21:20:22
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-23 22:44
你这样说过于笼统，没法了解你的具体提取操作是怎么样的啊。肯定你提取过程中出现了问题。
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2楼2010-04-23 21:36:10
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果你提别的菌的质粒没有问题的话；估计，提不出来很可能就不是阳性转化子
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-04-23 21:38:40
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jackiechan

木虫 (小有名气)
"提不出来很可能就不是阳性转化子"
但转化子能在卡那的lb培养基中生长，而未转化的e.coli k-12不能生长啊
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4楼2010-04-23 22:59:59
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★ ★
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-26 17:09
楼主是用试剂盒提的还是纯手工提的？
提别的质粒有问题吗？感觉给的表述太少了
pET28a的拷贝量比起克隆质粒来说要低一点，浓度低一点是正常的，但是不至于没有。
手工提的话会不会乙醇沉淀的时候不够温柔或离心时间不足就把底部的沉淀同乙醇一起给抛弃了？
你平皿上的菌有请有经验的人看过吗？有时候kan平皿上会长一种白的的，但比E.coli紧实【完全没有透明度】，边缘也更光滑的杂菌。
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终于熬成木虫了……
5楼2010-04-24 06:36:55
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jackiechan

木虫 (小有名气)
用试剂盒提的,提bl21的质粒没有问题,菌落也不是很白啊
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6楼2010-04-26 15:19:25
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jackiechan

木虫 (小有名气)
先谢谢你们，我的菌落有透明度的，应该不是污染，而且菌落pcr做出来了，但非特异性条带很亮，不知如何改进
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7楼2010-04-27 16:11:12
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