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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】在线等:E.coli BL21 转化子在kan平板上要长多久

质粒用的是pET29a,宿主菌是E.coli BL21 (DE3),抗生素是kan(卡那霉素)
请问转化后涂平板一般要长多长时间啊?
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)


xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 10:10:43
转化之后与原始菌株生长速度之间没有什么区别(抗生素不过量的话),正常情况转化后在12h之内是可以看到转化子菌落了。
2楼2011-04-09 10:08:19
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by ls2046 at 2011-04-09 10:08:19:
转化之后与原始菌株生长速度之间没有什么区别(抗生素不过量的话),正常情况转化后在12h之内是可以看到转化子菌落了。

谢谢!但是我看见pET表达手册上说,kan平板不长卫星菌落,37℃要倒置培养15-18小时的啊
3楼2011-04-09 10:11:28
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xiaoyu1014126(金币+2): 2011-04-09 10:23:05
不一定的
这个还得看你的蛋白对菌体有莫有毒性
要是 没有毒性的话,也即是不会干扰菌体自然生长的话
一般过夜就会生长出菌落来

但是要是蛋白有毒性的话
可能短的要近20小时
长的得好几天
我们师姐做的一个蛋白在37度24小时后4度近天菌落才长出来
4楼2011-04-09 10:20:59
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xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 10:44:17
一般的12-24h,如果不长可以放置时间长点,kan比Amp稳定,不容易失活,不容易长出卫星菌落的。
5楼2011-04-09 10:30:13
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郝钊

金虫 (小有名气)


xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 12:52:43
我之前做转化,转化子一般在八个小时就可以看到,不过很小,12-14小时就长得差不多了,可以挑了。
6楼2011-04-09 11:33:00
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mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)


来学习的
7楼2011-04-09 11:59:18
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zhyzx

金虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
过夜基本上就差不多了,时间太长没长的话就有问题了
8楼2011-04-09 15:11:52
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一般过夜就可以长出来了,你的目的是看质粒是否已经转化进入目的菌中了。
等菌长出来验证一下就可以了!
9楼2011-04-09 17:41:43
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