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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】在线等：E.coli BL21 转化子在kan平板上要长多久
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】在线等：E.coli BL21 转化子在kan平板上要长多久

质粒用的是pET29a，宿主菌是E.coli BL21 （DE3），抗生素是kan（卡那霉素）
请问转化后涂平板一般要长多长时间啊？
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1楼 2011-04-09 09:43:56
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 10:10:43
转化之后与原始菌株生长速度之间没有什么区别（抗生素不过量的话），正常情况转化后在12h之内是可以看到转化子菌落了。
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2楼2011-04-09 10:08:19
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ls2046 at 2011-04-09 10:08:19:
转化之后与原始菌株生长速度之间没有什么区别（抗生素不过量的话），正常情况转化后在12h之内是可以看到转化子菌落了。

谢谢！但是我看见pET表达手册上说，kan平板不长卫星菌落，37℃要倒置培养15-18小时的啊
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3楼2011-04-09 10:11:28
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
xiaoyu1014126(金币+2): 2011-04-09 10:23:05
不一定的
这个还得看你的蛋白对菌体有莫有毒性
要是 没有毒性的话，也即是不会干扰菌体自然生长的话
一般过夜就会生长出菌落来

但是要是蛋白有毒性的话
可能短的要近20小时
长的得好几天
我们师姐做的一个蛋白在37度24小时后4度近天菌落才长出来
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4楼2011-04-09 10:20:59
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 10:44:17
一般的12-24h，如果不长可以放置时间长点，kan比Amp稳定，不容易失活，不容易长出卫星菌落的。
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5楼2011-04-09 10:30:13
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郝钊

金虫 (小有名气)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 12:52:43
我之前做转化，转化子一般在八个小时就可以看到，不过很小，12-14小时就长得差不多了，可以挑了。
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6楼2011-04-09 11:33:00
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mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)
来学习的
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7楼2011-04-09 11:59:18
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zhyzx

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
过夜基本上就差不多了，时间太长没长的话就有问题了
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8楼2011-04-09 15:11:52
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天使托

专家顾问 (职业作家)
一般过夜就可以长出来了，你的目的是看质粒是否已经转化进入目的菌中了。
等菌长出来验证一下就可以了！
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9楼2011-04-09 17:41:43
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