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barrey

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于微生物的转化

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     最近一直做细菌的转化,试图将携带GFP的载体转入细菌后再侵染植物,菌株是实验室分离的,别人提供的菌株有转化阳性的以及在大肠杆菌C118株系中的两种,由于转化阳性的菌株并不能侵染我的目标植物,我提取自己分离的菌株的感受态后电转从C118株系中提取的质粒DNA,在平板上能长出克隆,但是并不能检测到绿色荧光,摇菌后直接观察也没有,直接以菌液为模板扩增GFP的结果也为阴性(GFP整合到细菌基因组中),可能转化结果为阴性。
另外,曾经提取一个克隆子摇菌产物的DNA,用GFP引物扩增结果为阳性,片段大小与质粒DNA扩增结果一致,而与转化阳性菌株扩增的片段大小存在差异,一直很费解,同样的细菌转化后片段会不一致,同样的载体,不知道表述清楚没有,请高手指点
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