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虫虫6527

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】筛选转化子 已有5人参与

我转化基因到TOP10,长出来的单菌落做PCR有时候没有带,但是提出质粒P就有带,不知道是什么原因,哪位指教一下,谢谢~
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ben1147

木虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流 2010-07-15 18:20:43
直接提质粒酶切鉴定呗

PCR验证不保险,万一污染了什么的,结果不好解释

酶切是群体性质,比较保险
2楼2010-07-15 18:08:36
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虫虫6527

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-07-15 18:08:36:
直接提质粒酶切鉴定呗

PCR验证不保险,万一污染了什么的,结果不好解释

酶切是群体性质,比较保险

验证转化子直接用酶切成本有点高吧,验一次用半管酶
3楼2010-07-15 19:40:16
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎交流! 2010-07-15 22:20:19
引用回帖:
Originally posted by 虫虫6527 at 2010-07-15 19:40:16:

验证转化子直接用酶切成本有点高吧,验一次用半管酶

怎么会用那么多。。。。。。。。
Takara的Eco RI那么一大管子,得用多久啊。。。。。。
挑菌也挑不了多少啊,顶多二三十个克隆吧
4楼2010-07-15 20:42:25
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jqq1985

银虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+2):谢谢分享 2010-07-16 10:59:01
引用回帖:
Originally posted by 虫虫6527 at 2010-07-15 19:40:16:

验证转化子直接用酶切成本有点高吧,验一次用半管酶

酶切10微升体系只要加0.3微升酶就够了,枪头蘸一下的量就可以了。再说按照经验,要是一个板子上挑了十个都没有一个对的基本就可以重做了。一般我挑4到6个,没一个对的我就重做了
5楼2010-07-16 10:05:58
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zijing5322

铁虫 (小有名气)

PCR不准 酶切比较有说服力
6楼2010-07-16 15:51:27
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ymzfeng

金虫 (小有名气)

酶切和测序最保险了
PCR有假阳性
7楼2010-07-16 19:48:01
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