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xiezhenrong金虫 (正式写手)
北斗星
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[交流]
【求助/交流】甲醇酵母pMAD11表达外源蛋白问题
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| 本人使用载体pPIC9K在酵母pMAD11表达外源蛋白，将所筛选的白斑挑到试管中由FA+培养1天，离心收集菌体，转FB+培养基中培养2天，结果所有的试管中都出现菌体凝集形成一团或絮状物，在FB+中培养还出现菌体由乳色变红或黄，后来发现所挑所有白斑在平板上4℃冰箱保存一段时间都变红了，这是否说明原先所挑的酵母转化子都为假阳性？或者说转入的质粒不稳定？最近又做了一次使用抗性G418筛选出的白斑放入FA+中培养生长的很慢，FA+中培养2天就出现菌体凝集，离心收集菌体转入FB+中继续培养，菌体颜色未出现变化，始终乳色。两次菌体都凝集。（宿主pMAD11纯培养很正常菌体红色无凝集）第一次做不知道是什么原因，很迷茫，肯请高手指点，谢谢！ |
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