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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求助，蛋白电泳跑胶的问题
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燕子sy

银虫 (小有名气)

[求助] 求助，蛋白电泳跑胶的问题 已有4人参与

本人近期在跑胶（sds-page），以前从没做过，那胶跑得实在是不忍直视啊，大神们帮忙看看都有些什么问题，如何改进，我知道有很多问题，求吐槽，谢谢！
实验结果见下图，很明显的几个问题，一、空白的那组条带，整条都很蓝，都看不清条带了；二、加样组有很多竖着的条带；三、想让条带再往下跑跑。

求助，蛋白电泳跑胶的问题
0118-2.PNG


求助，蛋白电泳跑胶的问题-1
0118-3.PNG
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我比小强还小强，越挫越勇！
1楼 2017-01-18 10:10:26
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
燕子sy(youlinglyw代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2017-01-22 18:31:31
说明你的蛋白酶效果很好，蛋白质都基本被降解了
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2楼2017-01-18 10:22:28
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燕子sy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-01-18 10:22:28
说明你的蛋白酶效果很好，蛋白质都基本被降解了

哈哈，效果是毋庸置疑的，就是为加酶组有很多乱七八糟也看不明的条带，还有我那空白对照为什么那样，底色那么蓝？您知道吗？
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我比小强还小强，越挫越勇！
3楼2017-01-18 10:56:39
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 燕子sy at 2017-01-18 10:56:39
哈哈，效果是毋庸置疑的，就是为加酶组有很多乱七八糟也看不明的条带，还有我那空白对照为什么那样，底色那么蓝？您知道吗？...

蓝色是蛋白
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4楼2017-01-18 11:25:22
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燕子sy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-01-18 11:25:22
蓝色是蛋白...

空白组是不是上样量过大了，但是1mm的胶，我都没上到20ug啊
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我比小强还小强，越挫越勇！
5楼2017-01-18 12:40:39
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
marker跑的不好  应该是胶配的有问题吧

另外你用的所有试剂  哪些是自己买的？哪些是自己配的？
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6楼2017-01-18 13:12:51
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燕子sy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-01-18 13:12:51
marker跑的不好  应该是胶配的有问题吧

另外你用的所有试剂  哪些是自己买的？哪些是自己配的？

哇，我感觉终于看到解决问题的希望了！！
对，有可能是配胶的问题。
配胶，考马斯亮蓝染色脱色用的都是碧云天的试剂盒，running buffer自己配的，loading buffer买的，也是碧云天的。
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7楼2017-01-18 13:46:19
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
燕子sy: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢你的回答，我跑完这次可能还要再请教你哦 2017-01-19 09:56:57
引用回帖:
7楼: Originally posted by 燕子sy at 2017-01-18 13:46:19
哇，我感觉终于看到解决问题的希望了！！
对，有可能是配胶的问题。
配胶，考马斯亮蓝染色脱色用的都是碧云天的试剂盒，running buffer自己配的，loading buffer买的，也是碧云天的。...

如果是买的试剂  那应该按照说明书来就行
running buffer你的配方是什么？

另外  虽然你marker跑得不好  但是也可以看出条带  所以你的样品应该也有一点问题  
你的空白组  就是不加酶的那个  是什么样品？？是蛋白吗？
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8楼2017-01-18 15:15:32
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燕子sy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-01-18 15:15:32
如果是买的试剂  那应该按照说明书来就行
running buffer你的配方是什么？

另外  虽然你marker跑得不好  但是也可以看出条带  所以你的样品应该也有一点问题  
你的空白组  就是不加酶的那个  是什么样品？？ ...

我的running buffer配方：3.03g的tris，14.4g的甘氨酸，1g的SDS溶于1000mL的去离子水中。
我的空白组是结肠癌rko细胞的总蛋白。
我的实验目的是寻找某个小分子药物的靶点，实验方法是加药培养，提取总蛋白，加酶水解，跑胶寻找差异条带，然后就跑成了上面那样裂解液是碧云天买的，蛋白酶是sigma的。
我感觉制胶肯定是有问题的，然后我的样品和loading buffer好像也有问题，但我不知道问题在哪儿！
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我比小强还小强，越挫越勇！
9楼2017-01-18 16:28:40
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 燕子sy at 2017-01-18 16:28:40
我的running buffer配方：3.03g的tris，14.4g的甘氨酸，1g的SDS溶于1000mL的去离子水中。
我的空白组是结肠癌rko细胞的总蛋白。
我的实验目的是寻找某个小分子药物的靶点，实验方法是加药培养，提取总蛋白，加酶 ...

running buffer 的配方跟我们的一样  应该没有问题
那你先从制胶的问题开始解决  配胶溶液的时候一定要混匀  并且要凝固充分  可以放在37℃凝胶40min-1小时  装电泳板的时候保证板底没有气泡

你可以找一个已知分子量的标准蛋白一起跑一下  或者是别人的蛋白电泳样品  能够跑出正常条带的就行  一起对比一下
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燕子sy
10楼2017-01-19 08:34:51
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