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求助,银染法背景色严重
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采用聚丙烯酰胺凝胶电泳跑的蛋白,之后采用银染法进行染色,染色效果重复性很差,偶尔条带清晰,大多数时候整个胶都变褐色了,分不清条带,不知道到底是什么原因,希望有做银染法经验的同学传授一下~~谢谢~~ 这是我做的银染法: 1.水洗3次,5min/次 2.固定:固定液(25ml乙酸,100ml乙醇,加水至250ml)摇浸2h 3.敏华:敏化液(0.5g硫代硫酸钠,17g乙酸钠,75ml乙醇,加水至250ml )摇浸30min 4.漂洗:250ml双蒸水洗3次,5min/次 5.银染:AgNO3溶液(1.25g/500ml水)中摇浸20min(报纸避光) 6.漂洗:250ml双蒸水洗2次,1min/次 7.显色:显色液(12.5g碳酸钠,200微升甲醛,加水至500ml)显色约2-5min,2次 8.终止:终止液(3.65gEDTA溶于250ml水)摇浸10min 9.漂洗:500ml双蒸水洗2次,10min/次 在这先谢谢大家了~~~做过好多次银染都不算成功,很多时候背景和条带同时变成褐色,希望能找到原因~~~呵呵 |
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2楼2011-10-18 08:50:31
3楼2011-10-18 10:04:22
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LiJie861027
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