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燕子sy

银虫 (小有名气)

[求助] 求助,蛋白电泳跑胶的问题已有4人参与

本人近期在跑胶(sds-page),以前从没做过,那胶跑得实在是不忍直视啊,大神们帮忙看看都有些什么问题,如何改进,我知道有很多问题,求吐槽,谢谢!
实验结果见下图,很明显的几个问题,一、空白的那组条带,整条都很蓝,都看不清条带了;二、加样组有很多竖着的条带;三、想让条带再往下跑跑。

求助,蛋白电泳跑胶的问题
0118-2.PNG


求助,蛋白电泳跑胶的问题-1
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我比小强还小强,越挫越勇!
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燕子sy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-01-18 15:15:32
如果是买的试剂  那应该按照说明书来就行
running buffer你的配方是什么?

另外  虽然你marker跑得不好  但是也可以看出条带  所以你的样品应该也有一点问题  
你的空白组  就是不加酶的那个  是什么样品?? ...

我的running buffer配方:3.03g的tris,14.4g的甘氨酸,1g的SDS溶于1000mL的去离子水中。
我的空白组是结肠癌rko细胞的总蛋白。
我的实验目的是寻找某个小分子药物的靶点,实验方法是加药培养,提取总蛋白,加酶水解,跑胶寻找差异条带,然后就跑成了上面那样裂解液是碧云天买的,蛋白酶是sigma的。
我感觉制胶肯定是有问题的,然后我的样品和loading buffer好像也有问题,但我不知道问题在哪儿!
我比小强还小强,越挫越勇!
9楼2017-01-18 16:28:40
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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燕子sy(youlinglyw代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2017-01-22 18:31:31
说明你的蛋白酶效果很好,蛋白质都基本被降解了
2楼2017-01-18 10:22:28
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燕子sy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-01-18 10:22:28
说明你的蛋白酶效果很好,蛋白质都基本被降解了

哈哈,效果是毋庸置疑的,就是为加酶组有很多乱七八糟也看不明的条带,还有我那空白对照为什么那样,底色那么蓝?您知道吗?
我比小强还小强,越挫越勇!
3楼2017-01-18 10:56:39
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 燕子sy at 2017-01-18 10:56:39
哈哈,效果是毋庸置疑的,就是为加酶组有很多乱七八糟也看不明的条带,还有我那空白对照为什么那样,底色那么蓝?您知道吗?...

蓝色是蛋白
4楼2017-01-18 11:25:22
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