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萝卜变青青

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,SDS-page电泳跑不出来已有3人参与

各位大神,我是做细菌蛋白提取的,提取的蛋白用BCA检测浓度检测的出来。但是用于跑电泳跑不出来。我用过12%,10%,8%的分离胶,marker每次都跑的出来,但是我的样品每次都跑不出来。请问是什么原因?BCA测蛋白浓度测的出来能不能证明有蛋白???
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叶晓波1572

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
萝卜变青青: 金币+2, 我提取的总蛋白,应该说跑出来的是很多条带,BCA测出的蛋白浓度是2mg/ml,上样buffer是5X,我是稀释蛋白浓度到1mg/ml,然后取12μl的样品和3μl的上样buffer混合,上样10μl。请问会不会是我的总蛋白的浓度是1mg/ml,实际上每种蛋白的含量很少,所以颜色很浅几乎没有呢。 2016-04-11 21:32:11
楼主提供的信息不明确  你的目的蛋白分子量是多少  BCA测得的浓度时多少  你上样量多少
2楼2016-02-23 13:11:56
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
3楼2016-02-23 23:18:58
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denny_125

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 玉皇大帝捷哥 at 2016-02-23 23:18:58
用nanodrop测一下

同意

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4楼2016-02-23 23:43:28
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star013

新虫 (知名作家)


我们可以把你您做实验技术服务,蛋白表达纯化检测这块还是很不错的

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5楼2016-02-24 08:24:33
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对木简歌

铁虫 (小有名气)

有没有可能蛋白降解?
沧海月明,且听风吟
6楼2016-03-17 10:55:20
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的样品是纯的目的蛋白吗?BCA测的是样品中总的目的蛋白含量。如果你的样品没有经过纯化,很多杂蛋白也会被算进去。另外,BCA法的干扰物质有很多,要保证你的样品里没有那些东西测出来才准确。

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读书廿年倦写字,如今翻书不识志,若知眷书悔前程,无如渔樵未识时。三年担柴熟山性,三年苦网谙水汹,前程在心自倦舒,识志何用书中清。
7楼2016-03-17 11:49:35
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

说一千道一万,来上图吧

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
8楼2016-03-17 12:01:12
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刘曦lxlx

新虫 (初入文坛)

请问您当时知道怎么回事了吗?我现在遇到了同样的问题

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9楼2017-12-01 20:06:36
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