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weiminhb

铁虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】关于SDS-PAGE

最近做SDS-PAGE，跑出来的带总是连成一片，分不开。而且marker也很模糊，拖尾了。是什么原因呢？
还有我的样品是胞内产物，我是这样处理样品的：将培养液离心，取菌体，然后用PBS悬浮，加入等量的SDS上样缓冲液，沸水煮5min，然后离心取上清，将上清跑电泳。请问这样的操作对吗？请高手点评。

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1楼 2010-12-24 18:46:00

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

weiminhb(金币+3): 2010-12-24 21:00:49

过程没有大问题，不知道你的SDS上样缓冲液是不是2*的，你加了等体积。如果不是大肠杆菌而是革兰氏阳性菌的话，最好能煮上10min。

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2楼2010-12-24 19:08:21

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weiminhb

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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引用回帖:

Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-24 19:08:21:
过程没有大问题，不知道你的SDS上样缓冲液是不是2*的，你加了等体积。如果不是大肠杆菌而是革兰氏阳性菌的话，最好能煮上10min。

是2*的，是斯氏假单胞菌。
带扩散是什么原因呢？是胶的问题还是？

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3楼2010-12-24 21:00:35

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

引用回帖:

Originally posted by weiminhb at 2010-12-24 21:00:35:

是2*的，是斯氏假单胞菌。
带扩散是什么原因呢？是胶的问题还是？

应该是胶的原因，还有电压放低一点。

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4楼2010-12-24 22:19:07

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rioarsenal

金虫 (正式写手)

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★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-24 23:15:17

引用回帖:

Originally posted by weiminhb at 2010-12-24 18:46:00:
最近做SDS-PAGE，跑出来的带总是连成一片，分不开。而且marker也很模糊，拖尾了。是什么原因呢？
还有我的样品是胞内产物，我是这样处理样品的：将培养液离心，取菌体，然后用PBS悬浮，加入等量的SDS上样 ...

电泳液离子浓度高，电流大，产热较多，带型扩散。

可以降低电泳液浓度，还可以在低温下电泳

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5楼2010-12-24 22:27:49

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