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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于SDS-PAGE
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于SDS-PAGE

最近做SDS-PAGE，跑出来的带总是连成一片，分不开。而且marker也很模糊，拖尾了。是什么原因呢？
       还有我的样品是胞内产物，我是这样处理样品的：将培养液离心，取菌体，然后用PBS悬浮，加入等量的SDS上样缓冲液，沸水煮5min，然后离心取上清，将上清跑电泳。请问这样的操作对吗？请高手点评。
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1楼 2010-12-24 18:46:00
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
weiminhb(金币+3): 2010-12-24 21:00:49
过程没有大问题，不知道你的SDS上样缓冲液是不是2*的，你加了等体积。如果不是大肠杆菌而是革兰氏阳性菌的话，最好能煮上10min。
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2楼2010-12-24 19:08:21
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weiminhb

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-24 19:08:21:
过程没有大问题，不知道你的SDS上样缓冲液是不是2*的，你加了等体积。如果不是大肠杆菌而是革兰氏阳性菌的话，最好能煮上10min。

是2*的，是斯氏假单胞菌。
    带扩散是什么原因呢？是胶的问题还是？
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3楼2010-12-24 21:00:35
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-12-24 21:00:35:




    是2*的，是斯氏假单胞菌。
    带扩散是什么原因呢？是胶的问题还是？

应该是胶的原因，还有电压放低一点。
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4楼2010-12-24 22:19:07
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-24 23:15:17
引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-12-24 18:46:00:
最近做SDS-PAGE，跑出来的带总是连成一片，分不开。而且marker也很模糊，拖尾了。是什么原因呢？
       还有我的样品是胞内产物，我是这样处理样品的：将培养液离心，取菌体，然后用PBS悬浮，加入等量的SDS上样 ...

电泳液离子浓度高，电流大，产热较多，带型扩散。

可以降低电泳液浓度，还可以在低温下电泳
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5楼2010-12-24 22:27:49
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wdyym

禁言 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2010-12-24 22:41:37
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buckuper

铜虫 (小有名气)
摸索一下胶配制和电压的最适条件
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7楼2010-12-24 22:44:10
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