| 查看: 1113 | 回复: 3 | ||
fe123333金虫 (小有名气)
|
[求助]
各位大神，求助一下双向电泳横纹问题，跪谢！ 已有2人参与
|
|
各位大神，我做的是霉菌蛋白的双向电泳，用的是伯乐17cm ph 3-10 线性的胶条，染色方法为银染但是跑了很多次都有严重的横纹出现，不知道是提取蛋白时出了问题（盐离子之类的问题）还是等电聚焦程序设定出了问题。最近愁死了，都快抑郁了，谁能帮我分析一下，欢迎交流讨论。灰常感谢！！ 下面是蛋白提取方法、等电聚焦程序和胶图。 提取总蛋白： （1）研磨：预先将研钵置于-20℃的冰箱内冷冻；取液氮冻存的菌体，放入预冷的研钵内研磨至粉末状； （2）抽提：20mM Tris-Cl，0.5% Triton X-100 (v/v)，0.5M EDTA，pH 8.0，0.07% β-巯基乙醇，蛋白酶抑制剂； （3）离心：12000 rpm，4℃，离心10 min （4）沉淀：利用氯仿甲醇沉淀法移除核酸和色素。 17cm胶条(PH3-10)的等电聚焦程序 水化 50V 14h 主动水化 S1 250V 线性 1h 除盐 S2 500V 线性 1h 除盐 S3 1000V 快速 1h 除盐 S4 10,000V 线性 5h 升压 S5 10,000V 快速 90,000Vh 聚焦 S6 500V 快速 12h 保持  2D图.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有51人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助：双极性电极的结构讨论
已经有4人回复
- 各位大神，求助一下双向电泳横纹问题，跪谢！
已经有11人回复
- 消除催化零回复，感谢虫友来交流（十七）
已经有12人回复
- 空间站转位路径规划，求助，请各位大神不吝赐教
已经有0人回复
- 求助MTT与双染测凋亡
已经有0人回复
- 消除催化零回复，感谢虫友来交流(七）
已经有16人回复
- 关于香港理工大学的博士申请的问题
已经有22人回复
- 消除催化零回复，感谢虫友来交流(三）
已经有13人回复
- IEEE transaction on wireless communication 投稿（单栏还是双栏提交论文）求助
已经有9人回复
- 乳酸乳球菌代谢产物的分离纯化求助
已经有12人回复
- 双向电泳求助
已经有2人回复
- 双节将至，工作总结，让我们交流更融洽，生活更美好
已经有130人回复
- 研二小硕，计算机专业，对于申请定位有疑惑，特请教各位虫子
已经有7人回复
- 各位虫有，小弟求助 从哪可以找到一些关于最优化算法的算例
已经有1人回复
- 长片段连接问题
已经有14人回复
- Elsevier投稿用word排版求助！
已经有5人回复
- 【求助】R，R-环己二胺的单Boc保护以及和吡啶甲醛的还原胺化
已经有13人回复
2楼2015-08-28 18:08:58
fe123333
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 611.8
- 散金: 2
- 帖子: 127
- 在线: 35.6小时
- 虫号: 2793372
- 注册: 2013-11-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
3楼2015-08-29 09:00:02
4楼2015-11-09 14:55:20
