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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求助，蛋白电泳跑胶的问题
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燕子sy

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-01-19 08:34:51
running buffer 的配方跟我们的一样  应该没有问题
那你先从制胶的问题开始解决  配胶溶液的时候一定要混匀  并且要凝固充分  可以放在37℃凝胶40min-1小时  装电泳板的时候保证板底没有气泡

你可以找一个已知 ...

好的，我昨天重新制了胶，不过装电泳板的这个细节我确实没注意，准备一个个排除吧。谢谢你！
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我比小强还小强，越挫越勇！
11楼2017-01-19 09:52:57
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燕子sy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-01-19 08:34:51
running buffer 的配方跟我们的一样  应该没有问题
那你先从制胶的问题开始解决  配胶溶液的时候一定要混匀  并且要凝固充分  可以放在37℃凝胶40min-1小时  装电泳板的时候保证板底没有气泡

你可以找一个已知 ...

你好，我今天，又跑了个胶，你帮我看下，还是有很多问题
求助，蛋白电泳跑胶的问题
0119.PNG
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12楼2017-01-19 16:34:46
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金刚太郎

新虫 (小有名气)
初步觉得有两个方面的问题，第一胶本身的问题，因为连marker都不能正常体现，第二点出现的纵向条纹很大一部分原因是上样液里面大颗粒固型物引起的，一样一样排除，，我之前做的时候出现的问题是丙烯酰胺发生了降解，胶的问题话建议把所有体系重新配置，脱色液染色液要求不高，一般的药品配置就可以了，

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13楼2017-01-19 20:08:03
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金刚太郎

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 燕子sy at 2017-01-19 16:34:46
你好，我今天，又跑了个胶，你帮我看下，还是有很多问题

0119.PNG
...

你这是要找差异带，对胶的成色的要求度很高，这块胶上marker不是很好看，建议再找找制胶的原因，

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

燕子sy
14楼2017-01-19 20:16:06
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燕子sy

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by 金刚太郎 at 2017-01-19 20:16:06
你这是要找差异带，对胶的成色的要求度很高，这块胶上marker不是很好看，建议再找找制胶的原因，
...

好的，胶应该是有问题的，我打算再制胶，慢慢排除，最后胶都没有问题了，那就是我样品的问题了，谢谢你！你没有应助，只能送你小红花了。
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我比小强还小强，越挫越勇！
15楼2017-01-20 08:05:58
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 燕子sy at 2017-01-19 16:34:46
你好，我今天，又跑了个胶，你帮我看下，还是有很多问题

0119.PNG
...

1、marker能跑出  但还是不清楚  所以可能制胶上还有一点问题  除了楼上说的配胶组分重新配置外  胶浓度是否需要优化一下？你的蛋白是否适合用普通的SDS-PAGE来检测？
2、蛋白样品制备后用离心机离心一下  然后取上清上样试试看
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16楼2017-01-20 08:26:26
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议你还是先找个隔壁实验室，带个样，你现在几个地方都怀疑有问题，还是先排除样品的问题吧
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17楼2017-01-22 14:18:04
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论坛小虫虫

至尊木虫 (著名写手)
你浓缩胶和分离胶配制的时候，洗干净了吗？

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18楼2017-01-22 14:39:55
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燕子sy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-01-20 08:26:26
1、marker能跑出  但还是不清楚  所以可能制胶上还有一点问题  除了楼上说的配胶组分重新配置外  胶浓度是否需要优化一下？你的蛋白是否适合用普通的SDS-PAGE来检测？
2、蛋白样品制备后用离心机离心一下  然后取 ...

恩，年前都失败了，最近在准备样品，准备再做
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我比小强还小强，越挫越勇！
19楼2017-02-16 13:10:32
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燕子sy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2017-01-22 14:18:04
建议你还是先找个隔壁实验室，带个样，你现在几个地方都怀疑有问题，还是先排除样品的问题吧

孤家寡人啊，没有隔壁实验室
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我比小强还小强，越挫越勇！
20楼2017-02-16 13:11:01
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