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feng920308

铜虫 (初入文坛)

[求助] rna提取步骤，大家帮我看看有没有问题 已有8人参与

rna提出的量很多，但是都降解。。是不是提取步骤出了问题。。

rna提取步骤，大家帮我看看有没有问题


rna提取步骤，大家帮我看看有没有问题-1


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1楼 2015-12-07 12:34:42
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉2、3步骤静置时间有点长。还有不知道你过夜沉淀放在哪了，室温还是冰箱？总体感觉，整个实验时间太长。
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生物科学
2楼2015-12-07 12:57:52
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ttxs99

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1，最重要的改变
听我的，样品在原有的基础上****至少减半****
不然TRIZOL试剂无法保护你的样品；
2.所有耗材用无RNAase，在实验前，超净台灭菌30min，实验过程中，只要是离开超净台，超净台均开紫外，注意试剂和样品不要被灭；
3.时间，均要做一些调整
为省事把步骤和我提的效果图上传
链接: http://pan.baidu.com/s/1o6PcFgQ 密码: inxq
链接: http://pan.baidu.com/s/1getdiiJ 密码: 2q2a
4.跑胶检测。。。
胶的浓度1~1.5%，不要太软，不然条带变形
电压150v左右，时间20min以内。。
电泳液和凝胶现配现用

最后，提RNA是很多细节决定了最终结果，每个细节均要注意，其实有时候没必要用太多组织，提太多量，反正也用不完，何不保证品质呢。

第一次应助，望采纳，金币给不给无所谓
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淡定
14楼2015-12-07 22:19:47
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feng920308

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lsl635600374 at 2015-12-07 13:29:58
用研磨仪研磨时那个小球也要用DEPC水处理，浸泡过夜
2、3静置一般5-10min就可以
第8步干燥的时候可以用枪头把EP管里的乙醇吸处理，然后静置3min，再直接加无酶水溶解就好
另外，楼上说的过夜沉淀是以前分子克隆上 ...

那这些会导致rna降解嘛

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5楼2015-12-07 13:32:40
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匿名

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9楼2015-12-07 20:51:06
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zzyxiang2012

木虫 (知名作家)
加trizol室温10分钟就行了。其余的静置，离心通通10分钟。

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10楼2015-12-07 20:59:44
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普通回帖

lsl635600374

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用研磨仪研磨时那个小球也要用DEPC水处理，浸泡过夜
2、3静置一般5-10min就可以
第8步干燥的时候可以用枪头把EP管里的乙醇吸处理，然后静置3min，再直接加无酶水溶解就好
另外，楼上说的过夜沉淀是以前分子克隆上面说的酚-异硫氰酸胍法提RNA时异丙醇-20℃过夜沉淀，现在都用trizol，一般2小时左右就行了。
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我们用多一点点的辛苦，来交换多一点点的幸福。
3楼2015-12-07 13:29:58
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feng920308

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-07 12:57:52
感觉2、3步骤静置时间有点长。还有不知道你过夜沉淀放在哪了，室温还是冰箱？总体感觉，整个实验时间太长。

那这可能导致rna降解嘛，虽然有trizol。或者是trizol导致的降解。

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4楼2015-12-07 13:30:57
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lsl635600374

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by feng920308 at 2015-12-07 13:32:40
那这些会导致rna降解嘛
...

RNA在TRIzol试剂中不会被RNase污染，但在氯仿分相后的上清中已经没有了RNase的抑制剂，所以分相后的所有操作要特别小心，保证使用的离心管和枪头都是RNase-free的。这是trizol说明书上写的
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我们用多一点点的辛苦，来交换多一点点的幸福。
6楼2015-12-07 13:42:14
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灵语晗001

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lsl635600374 at 2015-12-07 13:29:58
用研磨仪研磨时那个小球也要用DEPC水处理，浸泡过夜
2、3静置一般5-10min就可以
第8步干燥的时候可以用枪头把EP管里的乙醇吸处理，然后静置3min，再直接加无酶水溶解就好
另外，楼上说的过夜沉淀是以前分子克隆上 ...

您好，关于做实验方面的问题，可否交流下？

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7楼2015-12-07 20:37:00
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匿名

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8楼2015-12-07 20:49:11
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