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青青yqq

铜虫 (初入文坛)

[求助] 电泳图没有跑出亮斑反而出现黑点，到底是怎么回事？ 已有1人参与

请教琼脂糖凝胶电泳高手！
    我第一次提取植物总RNA，－80℃冰箱保存一天后，直接跑凝胶电泳了，总RNA提取和电泳过程没做好无RNase防护措施，估计总RNA在电泳过程中降解了，没有出现RNA亮斑我可以理解，但是为什么会有黑色的斑点，求解！一下是我跑电泳的步骤:
1.称0.25g琼脂糖与25ml 1×TAE混匀，微波炉加热溶解，约60℃加入1ul EB溶液，制胶。
2.在PE手套上点2ul 6×loading buffer，在点8ul RNA样品，PE手套上混匀后点样。marker是DL200DNAmarker（因为暂时没有合适的RNAmarker，而且第一次跑电泳，为了观察凝胶是否能正常跑出亮斑，所以...）
3.电泳是120V，30min.
    初步怀疑是 6×lloading buffer的问题，因为6×lloading buffer的颜色是棕黄色，跟别人颜色不太一致。但是这是今年年初买的，还没过保质期。百思不得其解，请大家帮忙解答。图片是手机拍的，有点模糊，请谅解~
 http://\"电泳图没有跑出亮斑反而出现黑点，到底是怎么回事？\"
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1楼 2014-12-02 23:35:28
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cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-05 21:49:05
青青yqq: 金币+5, ★有帮助 2014-12-15 14:18:08
6×lloading buffer是黄色的不影响，与DNA或RNA混合后就是蓝色的，我觉得不是亮带是因为你的CCD没有调好。
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科研炮灰
2楼2014-12-03 11:10:13
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青青yqq

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cckk_2000 at 2014-12-03 11:10:13
6×lloading buffer是黄色的不影响，与DNA或RNA混合后就是蓝色的，我觉得不是亮带是因为你的CCD没有调好。

loading buffer 跟RNA混合以后确实变成蓝色了。CCD是什么？你的意思是在凝胶成像系统看图的时候光圈、聚焦等没调好吗？
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3楼2014-12-03 16:11:19
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