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青青yqq

铜虫 (初入文坛)

[求助] 电泳图没有跑出亮斑反而出现黑点,到底是怎么回事? 已有1人参与

请教琼脂糖凝胶电泳高手!
    我第一次提取植物总RNA,-80℃冰箱保存一天后,直接跑凝胶电泳了,总RNA提取和电泳过程没做好无RNase防护措施,估计总RNA在电泳过程中降解了,没有出现RNA亮斑我可以理解,但是为什么会有黑色的斑点,求解!一下是我跑电泳的步骤:
1.称0.25g琼脂糖与25ml 1×TAE混匀,微波炉加热溶解,约60℃加入1ul EB溶液,制胶。
2.在PE手套上点2ul 6×loading buffer,在点8ul RNA样品,PE手套上混匀后点样。marker是DL200DNAmarker(因为暂时没有合适的RNAmarker,而且第一次跑电泳,为了观察凝胶是否能正常跑出亮斑,所以...)
3.电泳是120V,30min.
    初步怀疑是 6×lloading buffer的问题,因为6×lloading buffer的颜色是棕黄色,跟别人颜色不太一致。但是这是今年年初买的,还没过保质期。百思不得其解,请大家帮忙解答。图片是手机拍的,有点模糊,请谅解~
 http://\"电泳图没有跑出亮斑反而出现黑点,到底是怎么回事?\"
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cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-05 21:49:05
青青yqq: 金币+5, 有帮助 2014-12-15 14:18:08
6×lloading buffer是黄色的不影响,与DNA或RNA混合后就是蓝色的,我觉得不是亮带是因为你的CCD没有调好。
科研炮灰
2楼2014-12-03 11:10:13
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青青yqq

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cckk_2000 at 2014-12-03 11:10:13
6×lloading buffer是黄色的不影响,与DNA或RNA混合后就是蓝色的,我觉得不是亮带是因为你的CCD没有调好。

loading buffer 跟RNA混合以后确实变成蓝色了。CCD是什么?你的意思是在凝胶成像系统看图的时候光圈、聚焦等没调好吗?
3楼2014-12-03 16:11:19
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