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ice无名

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 动物组织冻存,做PCR和western,以及提取RNA和蛋白步骤 已有2人参与

由于刚开始接触PCR和western不是很懂,请大家帮忙!
1.  PCR方面,RNA防降解,以及提出的RNA量,请问,是剪成小块放TRIZOL里剪碎即可,还是用匀浆器匀浆更好,我自己认为匀浆更好但操作麻烦,因为样品多,还要每个都洗好匀浆器?所以,我是想100mg组织置于1.5ml EP管,加1ml TRIZOL剪碎,封存-80,不知可否?
2. 动物组织放-80冻存,做western的是剪成小块放1.5ml EP管好,还是整块用锡纸包好,到时提蛋白再剪?
3. 有没详细点的提取步骤和个人经验,谢谢?
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木易肥田

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有人回复吗?什么组织啊?我们都是用液氮破碎组织的。。。
2楼2013-12-12 12:41:48
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ice无名: 金币+3, 有帮助, 其实我是想用剪碎的,这样可以减少很多时间,虽然RNA肯定没有匀浆的多,你觉得呢 2013-12-12 20:13:34
我刚用组织提取了RNA,组织可以用液氮研磨,也可用匀浆器研磨。液氮研磨操作比较麻烦,但是研磨效果好。匀浆器我开始用的电动的,但是电动的发热太厉害,而且电动的那个转头也得用DEPC水处理,还得不停地冲洗,比较麻烦,我后来改用手动匀浆器(提前泡酸处理,然后泡DEPC水处理,高压灭菌),放置于冰上,加入裂解液进行匀浆的,提取得到的RNA含量还挺高的。
3楼2013-12-12 14:47:54
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得剪碎的 不好,刚开始我用电动匀浆器,组织不是很碎,RNA含量都很低的。
4楼2013-12-12 21:47:24
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