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ice无名

至尊木虫 (著名写手)

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[求助] 动物组织冻存，做PCR和western，以及提取RNA和蛋白步骤已有2人参与

由于刚开始接触PCR和western不是很懂，请大家帮忙！
1. PCR方面，RNA防降解，以及提出的RNA量，请问，是剪成小块放TRIZOL里剪碎即可，还是用匀浆器匀浆更好，我自己认为匀浆更好但操作麻烦，因为样品多，还要每个都洗好匀浆器？所以，我是想100mg组织置于1.5ml EP管，加1ml TRIZOL剪碎，封存-80，不知可否？
2. 动物组织放-80冻存，做western的是剪成小块放1.5ml EP管好，还是整块用锡纸包好，到时提蛋白再剪？
3. 有没详细点的提取步骤和个人经验，谢谢？

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前进不必遗憾，若是美好叫做精彩，若是糟糕叫做经历

1楼 2013-12-11 13:22:42

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木易肥田

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

没有人回复吗？什么组织啊？我们都是用液氮破碎组织的。。。

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2楼2013-12-12 12:41:48

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daibingling

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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ice无名: 金币+3, ★有帮助, 其实我是想用剪碎的，这样可以减少很多时间，虽然RNA肯定没有匀浆的多，你觉得呢 2013-12-12 20:13:34

我刚用组织提取了RNA，组织可以用液氮研磨，也可用匀浆器研磨。液氮研磨操作比较麻烦，但是研磨效果好。匀浆器我开始用的电动的，但是电动的发热太厉害，而且电动的那个转头也得用DEPC水处理，还得不停地冲洗，比较麻烦，我后来改用手动匀浆器（提前泡酸处理，然后泡DEPC水处理，高压灭菌），放置于冰上，加入裂解液进行匀浆的，提取得到的RNA含量还挺高的。

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3楼2013-12-12 14:47:54

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