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[求助]
求助，提到了DNA，但是PCR扩不出来
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因为实验需要，使用的是大麦的种子而非叶片提取DNA，提完DNA后跑了下电泳，能看到很明显的条带。 但是做了几次退火温度和引物浓度梯度都扩不出来，只有引物二聚体，换了引物后还是这样......在看电泳图分析的时候我发现加了DNA模版与阴性对照相比，连引物二聚体都显得特别暗，现在初步怀疑是DNA模板的问题，请问各位在DNA提取和PCR的过程中，容易残留哪些东西会导致PCR抑制的？有没有相关的解决方法？ 顺便贴一下我的DNA提取步骤，大家帮忙参考下，谢谢  1） 30 ~ 60 mg样品在液氮中研细后转入1.5 ml Eppendorf离心管中，加入500 μl TES；加50 ~ 100 μg Proteinase K混匀，置于55 ~ 60 ℃水浴30 ~ 60 min，期间轻轻混匀几次； 2） 用5 M的NaCl溶液调节盐浓度至1.4 M，加1/10体积的10 ％CTAB，置于65 ℃水浴10 min； 3） 加入等体积的酚，氯仿，异戊醇，0 ℃孵育30 min 4） 4 ℃，13000 g离心，取上清液至1.5 ml离心管中，加入等体积氯仿，异戊醇混匀，0 ℃孵育30 min以上，4 ℃，13000 g离心； 5） 取上清，加3 μl RNase A，37 ℃水浴30 min，去除RNA； 6） 加0.6体积的预冷异丙醇，-20 ℃放置15 ~ 30 min； 7） 4 ℃，13000 g离心，弃异丙醇，70%乙醇洗2次。室温干燥，50 μl ddH2O溶解。 [ Last edited by starseeker on 2012-10-22 at 16:05 ] |
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