| 查看: 2574 | 回复: 17 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求助，提到了DNA，但是PCR扩不出来
|
||
因为实验需要，使用的是大麦的种子而非叶片提取DNA，提完DNA后跑了下电泳，能看到很明显的条带。 但是做了几次退火温度和引物浓度梯度都扩不出来，只有引物二聚体，换了引物后还是这样......在看电泳图分析的时候我发现加了DNA模版与阴性对照相比，连引物二聚体都显得特别暗，现在初步怀疑是DNA模板的问题，请问各位在DNA提取和PCR的过程中，容易残留哪些东西会导致PCR抑制的？有没有相关的解决方法？ 顺便贴一下我的DNA提取步骤，大家帮忙参考下，谢谢  1） 30 ~ 60 mg样品在液氮中研细后转入1.5 ml Eppendorf离心管中，加入500 μl TES；加50 ~ 100 μg Proteinase K混匀，置于55 ~ 60 ℃水浴30 ~ 60 min，期间轻轻混匀几次； 2） 用5 M的NaCl溶液调节盐浓度至1.4 M，加1/10体积的10 ％CTAB，置于65 ℃水浴10 min； 3） 加入等体积的酚，氯仿，异戊醇，0 ℃孵育30 min 4） 4 ℃，13000 g离心，取上清液至1.5 ml离心管中，加入等体积氯仿，异戊醇混匀，0 ℃孵育30 min以上，4 ℃，13000 g离心； 5） 取上清，加3 μl RNase A，37 ℃水浴30 min，去除RNA； 6） 加0.6体积的预冷异丙醇，-20 ℃放置15 ~ 30 min； 7） 4 ℃，13000 g离心，弃异丙醇，70%乙醇洗2次。室温干燥，50 μl ddH2O溶解。 [ Last edited by starseeker on 2012-10-22 at 16:05 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有195人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- RT-PCR的cDNA不能扩增出目的条带，只有内参基因能扩增出来
已经有14人回复
- 【求助】用cDNA的ORF序列以基因组DNA为模板 做PCR 为何P不出其对应的基因组序列?
已经有8人回复
- PCR扩不出目的基因
已经有14人回复
- 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
已经有30人回复
- [求助]高保真酶扩不出来
已经有15人回复
- 求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？
已经有24人回复
- 【求助/交流】土壤DNA提取及PCR
已经有20人回复
- 【求助/交流】为什么用纯化的PCR产物就扩不出来？？？
已经有14人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
- 【求助/交流】基因组PCR老P不出目的带
已经有39人回复
- 【求助/交流】PCR扩增核心片段，再也扩不出来了，怎么办
已经有16人回复
yananhl
银虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 499.1
- 散金: 167
- 帖子: 251
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 1892568
- 注册: 2012-07-14
- 专业: 分子与进化生态学
9楼2012-10-22 17:59:47
chui2004
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 6147.9
- 红花: 2
- 帖子: 370
- 在线: 96.3小时
- 虫号: 325716
- 注册: 2007-03-17
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤生物治疗
2楼2012-10-22 16:07:58
3楼2012-10-22 16:18:58
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
starseeker: 金币+5, ★有帮助 2012-10-22 17:33:01
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-30 15:53:47
感谢参与，应助指数 +1
starseeker: 金币+5, ★有帮助 2012-10-22 17:33:01
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-30 15:53:47
 本帖仅楼主可见 |
4楼2012-10-22 17:13:14
40