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lihongyou000

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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starseeker: 金币+1, 有帮助 2012-10-23 10:14:35
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-30 15:54:08
我觉得可能是你模板量的问题,目的基因拷贝太少。尝试把模板量加大一点,温度适当低一点,如果还不行,做巢式PCR,把第一轮产物做模版,进行第二轮PCR.
11楼2012-10-22 18:43:04
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★
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starseeker: 金币+1, 有帮助 2012-10-23 10:13:21
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-30 15:54:18
如果你能确定你的引物没有问题的话,换掉你所有的PCR体系中的试剂,包括酶,我以前也遇到过这种问题,当我把所有试剂都换掉之后,问题解决了,这是最快的解决方式
12楼2012-10-22 19:39:36
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jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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starseeker: 金币+4, 有帮助 2012-10-23 15:52:00
starseeker: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2012-10-23 15:52:48
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极应助 2012-10-30 15:54:33
我认为引物应该不会有问题,都是用软件设计的。只要严格按照要求设计就行。
我觉得你的DNA里可能有些抑制扩增的东西。建议:1.得到DNA后,在用试剂盒纯化一次。2.做PCR时,把模板DNA做个几个稀释梯度,从1:10 000到1:100,再试试。
13楼2012-10-22 20:02:30
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yangqq8282

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-30 15:54:44
1、确定你需要扩增的基因存在基因组中,而不是cDNA,NCBI上的基因序列要弄清来源。
2、你提取的DNA可以很好,不用担心DNA的问题,根据条带的亮度建议稀释一下再用。
3、如果基因序列信息没有问题,最有可能是引物问题。
14楼2012-10-22 20:48:10
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


starseeker: 金币+1, 有帮助 2012-10-23 10:14:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseeker at 2012-10-22 16:18:58
引物分别是20和21bp,我换过引物,应该不是这个问题
退火温度我从50~65都试过,不行.........

我是觉得你的引物可以再长一点,可以25到30左右!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
相信自己,一定能成功!
15楼2012-10-22 23:27:18
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starseeker

铜虫 (初入文坛)

谢谢LS各位热心朋友的回复,问题解决了,的确是我的DNA模版的问题,纯化后扩出来了,各位的建议给了我很大的帮助,谢谢了
16楼2012-10-23 15:50:54
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bluysky0902

金虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by starseeker at 2012-10-23 15:50:54
谢谢LS各位热心朋友的回复,问题解决了,的确是我的DNA模版的问题,纯化后扩出来了,各位的建议给了我很大的帮助,谢谢了

请问你是如何纯化的?我也遇到类似的问题,有的纯化了也不行,能否把步骤详细说说,谢谢~!
17楼2012-10-30 10:31:32
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bluysky0902

金虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by starseeker at 2012-10-23 15:50:54
谢谢LS各位热心朋友的回复,问题解决了,的确是我的DNA模版的问题,纯化后扩出来了,各位的建议给了我很大的帮助,谢谢了

楼主,最近都不来了么?
18楼2012-11-07 09:26:36
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