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蓝溪溪

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取细胞毒RNA后,电泳后什么也没有已有2人参与

大家好,小妹我是提取RNA 的新手,这几天从细胞毒中提取RNA ,电泳后总是什么也没有,好像一块空白胶,下面我把提取的步骤发上来,求助各位帮忙看一下。
我的细胞毒一开始是存在-20度,后来我在试验台上室温分装了一次,然后就又保存在-20了。
1、在1.5ml的eppendorf管中加入病毒原液500ul,再加入TRIzol LS500ul,充分混匀,室温放置10min;
2、加入200ul的氯仿,盖紧离心管盖,用力震荡离心管(溶液充分乳化,成乳白状,无分相现象),室温放置10min(由于氯仿沸点低、易挥发,振荡时离心管可能爆开,小心);
3、4℃,12000r/min离心15min,取上层液相移入另一管(切忌吸动白色中间相);
4、加入等体积异丙醇,轻轻颠倒离心管充分混匀液体,室温放置10min;
5、4℃,12000r/min离心15min用枪小心吸去所有上清;
6、1ml75%乙醇洗一遍,4℃,8000r/min离心10min用枪小心吸去所有上清,在超净台中干燥5min;
7、加入适量DEPC处理水。(
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cxkhhh

新虫 (小有名气)

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drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-11-24 10:20:19
一般使用试剂盒提取RNA,不会没有电泳的,用biog提取,其实效果还是不错的,不知道你这是什么情况。
2楼2018-11-23 14:04:49
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cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-11-24 10:20:26
我们用Trizol提RNA的时候,加入Trizol就强烈震荡5min,再静置5min,后面洗涤的酒精是用DEPC水配置的,其它的步骤大致相同,不知道这两步对试验有没有实质的影响。。。因为我提完RNA后很少跑电泳,直接反转录成cDNA做下面的试验了,感觉病毒RNA提取不会太难,提取过程中腰戴手套,口罩,尽量避免RNA酶的污染,还有一种可能是电泳没条带不一定一点RNA都没有。。。
3楼2018-11-23 16:14:25
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