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zzyxiang2012

木虫 (知名作家)

研磨直接低温加trizol用自动研磨仪就行。里边的配件先放低温冰箱遇冷。

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11楼2015-12-07 21:02:46
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林林!

新虫 (初入文坛)

所有的操作都在冰上操作。可能讲解的就不多了   再就是你等的时间太长了。我们提的时候最多间隔时间15分钟  并且都是在冰上操作的。

发自小木虫Android客户端
12楼2015-12-07 21:05:10
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兽医做科研

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
匀浆样品静置5分钟,4℃12000,离心5分钟取上清;加氯仿振荡15秒,充分乳化,置5分钟,12000,15分钟;取上清,加等体积异丙醇,混匀,置10分钟,离心10分钟;75%酒精洗两遍,各离心5分钟;室温晾干,rna边缘透明,约20分钟,加DEPC水溶解,4℃3小时

发自小木虫Android客户端
13楼2015-12-07 21:47:25
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ttxs99

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1,最重要的改变
听我的,样品在原有的基础上****至少减半****
不然TRIZOL试剂无法保护你的样品;
2.所有耗材用无RNAase,在实验前,超净台灭菌30min,实验过程中,只要是离开超净台,超净台均开紫外,注意试剂和样品不要被灭;
3.时间,均要做一些调整
为省事把步骤和我提的效果图上传
链接: http://pan.baidu.com/s/1o6PcFgQ 密码: inxq
链接: http://pan.baidu.com/s/1getdiiJ 密码: 2q2a
4.跑胶检测。。。
胶的浓度1~1.5%,不要太软,不然条带变形
电压150v左右,时间20min以内。。
电泳液和凝胶现配现用

最后,提RNA是很多细节决定了最终结果,每个细节均要注意,其实有时候没必要用太多组织,提太多量,反正也用不完,何不保证品质呢。

第一次应助,望采纳,金币给不给无所谓
淡定
14楼2015-12-07 22:19:47
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sanjingmeng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人觉得楼主采样过程可能有问题要不然所有都降解有点说不过去,全程是否低温也值得重视

发自小木虫Android客户端
我是钉子我怕锤子
15楼2015-12-07 22:30:44
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chenllili

铜虫 (正式写手)

环境和时间要尽量减少和避免RNA酶,每一个步骤除了必要时间,尽量缩短时间,所有用具都要DEPC水处理后灭菌,台面用乙醇多擦几遍,提取过程尽量在人少走动和少说话的区域,提取本人要带口罩和手套加一次性手套,并及时更换一次性手套。操作台面要时不时用乙醇喷擦。提取完毕,测完浓度后,速放-80。

发自小木虫Android客户端
16楼2015-12-07 22:46:26
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自然茶

新虫 (小有名气)

我也提过rna,植物果实rna. 使用CTAB法提的。但是降解也挺厉害的,好像有点降解也不影响用吧?你们说的trizol是什么方法?怎么看的?我刚学,不懂,希望能给说说。

发自小木虫IOS客户端
17楼2015-12-07 23:18:34
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自然茶

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by ttxs99 at 2015-12-07 22:19:47
1,最重要的改变
听我的,样品在原有的基础上****至少减半****
不然TRIZOL试剂无法保护你的样品;
2.所有耗材用无RNAase,在实验前,超净台灭菌30min,实验过程中,只要是离开超净台,超净台均开紫外,注意试剂和 ...

rna跑出来是几条带?三条吗?

发自小木虫IOS客户端
18楼2015-12-07 23:24:04
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cloud1986zcy

新虫 (小有名气)

异丙醇沉淀的时间也太长了,过夜??

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19楼2015-12-07 23:35:31
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cloud1986zcy

新虫 (小有名气)

提质量好的RNA的关键就是要快,懂吗,你这步骤需要大修

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20楼2015-12-07 23:36:37
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