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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » rna提取步骤，大家帮我看看有没有问题
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zzyxiang2012

木虫 (知名作家)
研磨直接低温加trizol用自动研磨仪就行。里边的配件先放低温冰箱遇冷。

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11楼2015-12-07 21:02:46
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林林！

新虫 (初入文坛)
所有的操作都在冰上操作。可能讲解的就不多了   再就是你等的时间太长了。我们提的时候最多间隔时间15分钟  并且都是在冰上操作的。

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12楼2015-12-07 21:05:10
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兽医做科研

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
匀浆样品静置5分钟，4℃12000，离心5分钟取上清；加氯仿振荡15秒，充分乳化，置5分钟，12000，15分钟；取上清，加等体积异丙醇，混匀，置10分钟，离心10分钟；75％酒精洗两遍，各离心5分钟；室温晾干，rna边缘透明，约20分钟，加DEPC水溶解，4℃3小时

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13楼2015-12-07 21:47:25
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ttxs99

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1，最重要的改变
听我的，样品在原有的基础上****至少减半****
不然TRIZOL试剂无法保护你的样品；
2.所有耗材用无RNAase，在实验前，超净台灭菌30min，实验过程中，只要是离开超净台，超净台均开紫外，注意试剂和样品不要被灭；
3.时间，均要做一些调整
为省事把步骤和我提的效果图上传
链接: http://pan.baidu.com/s/1o6PcFgQ 密码: inxq
链接: http://pan.baidu.com/s/1getdiiJ 密码: 2q2a
4.跑胶检测。。。
胶的浓度1~1.5%，不要太软，不然条带变形
电压150v左右，时间20min以内。。
电泳液和凝胶现配现用

最后，提RNA是很多细节决定了最终结果，每个细节均要注意，其实有时候没必要用太多组织，提太多量，反正也用不完，何不保证品质呢。

第一次应助，望采纳，金币给不给无所谓
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淡定
14楼2015-12-07 22:19:47
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sanjingmeng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人觉得楼主采样过程可能有问题要不然所有都降解有点说不过去，全程是否低温也值得重视

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我是钉子我怕锤子
15楼2015-12-07 22:30:44
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chenllili

铜虫 (正式写手)
环境和时间要尽量减少和避免RNA酶，每一个步骤除了必要时间，尽量缩短时间，所有用具都要DEPC水处理后灭菌，台面用乙醇多擦几遍，提取过程尽量在人少走动和少说话的区域，提取本人要带口罩和手套加一次性手套，并及时更换一次性手套。操作台面要时不时用乙醇喷擦。提取完毕，测完浓度后，速放-80。

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16楼2015-12-07 22:46:26
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自然茶

新虫 (小有名气)
我也提过rna，植物果实rna. 使用CTAB法提的。但是降解也挺厉害的，好像有点降解也不影响用吧？你们说的trizol是什么方法？怎么看的？我刚学，不懂，希望能给说说。

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17楼2015-12-07 23:18:34
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自然茶

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by ttxs99 at 2015-12-07 22:19:47
1，最重要的改变
听我的，样品在原有的基础上****至少减半****
不然TRIZOL试剂无法保护你的样品；
2.所有耗材用无RNAase，在实验前，超净台灭菌30min，实验过程中，只要是离开超净台，超净台均开紫外，注意试剂和 ...

rna跑出来是几条带？三条吗？

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18楼2015-12-07 23:24:04
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cloud1986zcy

新虫 (小有名气)
异丙醇沉淀的时间也太长了，过夜？？

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19楼2015-12-07 23:35:31
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cloud1986zcy

新虫 (小有名气)
提质量好的RNA的关键就是要快，懂吗，你这步骤需要大修

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20楼2015-12-07 23:36:37
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