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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » rna提取步骤，大家帮我看看有没有问题
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feng920308

铜虫 (初入文坛)

[求助] rna提取步骤，大家帮我看看有没有问题 已有8人参与

rna提出的量很多，但是都降解。。是不是提取步骤出了问题。。

rna提取步骤，大家帮我看看有没有问题


rna提取步骤，大家帮我看看有没有问题-1


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1楼 2015-12-07 12:34:42
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chenllili

铜虫 (正式写手)
环境和时间要尽量减少和避免RNA酶，每一个步骤除了必要时间，尽量缩短时间，所有用具都要DEPC水处理后灭菌，台面用乙醇多擦几遍，提取过程尽量在人少走动和少说话的区域，提取本人要带口罩和手套加一次性手套，并及时更换一次性手套。操作台面要时不时用乙醇喷擦。提取完毕，测完浓度后，速放-80。

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16楼2015-12-07 22:46:26
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉2、3步骤静置时间有点长。还有不知道你过夜沉淀放在哪了，室温还是冰箱？总体感觉，整个实验时间太长。
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生物科学
2楼2015-12-07 12:57:52
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lsl635600374

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用研磨仪研磨时那个小球也要用DEPC水处理，浸泡过夜
2、3静置一般5-10min就可以
第8步干燥的时候可以用枪头把EP管里的乙醇吸处理，然后静置3min，再直接加无酶水溶解就好
另外，楼上说的过夜沉淀是以前分子克隆上面说的酚-异硫氰酸胍法提RNA时异丙醇-20℃过夜沉淀，现在都用trizol，一般2小时左右就行了。
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我们用多一点点的辛苦，来交换多一点点的幸福。
3楼2015-12-07 13:29:58
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feng920308

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-07 12:57:52
感觉2、3步骤静置时间有点长。还有不知道你过夜沉淀放在哪了，室温还是冰箱？总体感觉，整个实验时间太长。

那这可能导致rna降解嘛，虽然有trizol。或者是trizol导致的降解。

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4楼2015-12-07 13:30:57
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