应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 目的片段的连接
251/3返回列表123下一页
查看: 1553  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

郑凤席

新虫 (小有名气)

[求助] 目的片段的连接 已有6人参与

我将目的片段与19-T连接转化，进行蓝白斑筛选，可是结果平板上要么什么都不长，要么就是全部长白斑没有蓝斑并且菌落稀少又大个。这到底是什么原因呢？请各位大神指点迷津！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-07 23:50:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
郑凤席: 金币+2, ★有帮助, 这些我都做过，验证过，没有得到我想要的答案，不过还是感谢ta 2015-07-10 15:55:00
估计是平板倒的不好，AMP没有起作用或者感受态细胞不好。
赞一下(1人) 回复此楼
123456
2楼2015-07-08 13:27:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nonglong1

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
郑凤席: 金币+2, ★有帮助, 我觉得这都不是关键，因为这些东西我肯定不会忘记 2015-07-10 15:56:13
长白斑就对了，插入目的基因后是白斑，空载是蓝斑。另外，记得加X-gal和IPTG，否则当然都是白斑。
赞一下(1人) 回复此楼
植物学
3楼2015-07-08 16:32:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Look_2014

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
郑凤席: 金币+1, ★★★很有帮助, 我会试着在改改链接条件 2015-07-10 15:57:46
原因可能有很多，1.目的片段回收质量   2.连接体系（目的片段与载体的比例有要求）3.连接条件  你自己慢慢尝试，祝好运

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
Look
6楼2015-07-09 10:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wsad5213

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-07-10 21:05:32
首先你要确定你的AMP浓度是正确的，不存在问题，并且在操作过程中做好灭菌工作，防止污染。如果这些都没问题，长出来来的菌不是你要的阳性菌，很可能是是在连接转化过程中出现问题，你的片段如果不是很大的话，连接一般没有问题，你看看是不是你制备的感受态细胞不是很好！good luck
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2015-07-09 16:25:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

郑凤席

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by nonglong1 at 2015-07-08 16:32:05
长白斑就对了，插入目的基因后是白斑，空载是蓝斑。另外，记得加X-gal和IPTG，否则当然都是白斑。

药品全都加了，全是白的应该是有问题的吧？我检测过白斑都是没有我要的目的前段

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2015-07-09 08:14:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郑凤席

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiqinger at 2015-07-08 13:27:49
估计是平板倒的不好，AMP没有起作用或者感受态细胞不好。

药品都没问题 感受态试过很多种  结果都是一样的

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-09 08:15:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你放冰箱两三个小时后看看，怀疑你的感受态有问题！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-07-09 16:34:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郑凤席

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by BBMC-2012 at 2015-07-09 16:34:41
你放冰箱两三个小时后看看，怀疑你的感受态有问题！

我培养的时间最少12h  最多20h两者都有放在冰箱  不管放多久都没有出现蓝斑  但是我不连载体的就只是目的片段的平板又有全是蓝斑   这样看来  感受态应该没问题吧？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-09 22:57:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郑凤席

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Look_2014 at 2015-07-09 10:55:25
原因可能有很多，1.目的片段回收质量   2.连接体系（目的片段与载体的比例有要求）3.连接条件  你自己慢慢尝试，祝好运

目的片段的回收经过检测  指导老师说没问题   连接体系是按照指导老师定的   反应条件也试过很多   结果都一样   不过还是谢谢你！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-07-09 23:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 郑凤席 的主题更新
251/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +3 pin8023 2026-02-28 5/250 2026-03-02 00:24 by 花YOU重开日
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭