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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 目的片段的连接
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)
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9楼: Originally posted by 郑凤席 at 2015-07-09 22:57:03
我培养的时间最少12h  最多20h两者都有放在冰箱  不管放多久都没有出现蓝斑  但是我不连载体的就只是目的片段的平板又有全是蓝斑   这样看来  感受态应该没问题吧？
...

是不是转化的时候操作有啥问题？

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11楼2015-07-09 23:02:11
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郑凤席

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by wsad5213 at 2015-07-09 16:25:06
首先你要确定你的AMP浓度是正确的，不存在问题，并且在操作过程中做好灭菌工作，防止污染。如果这些都没问题，长出来来的菌不是你要的阳性菌，很可能是是在连接转化过程中出现问题，你的片段如果不是很大的话，连接 ...

我的目的片段是800bp的   抗生素没问题  我纳闷的是为什么它会什么都不长  谢谢你！

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12楼2015-07-09 23:04:01
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郑凤席

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by BBMC-2012 at 2015-07-09 23:02:11
是不是转化的时候操作有啥问题？
...

操作反反复复进行过很多次  也尽量保持无菌状态了   该做的也做的  我很郁闷现在   还是谢谢你😊

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13楼2015-07-09 23:06:05
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易水秋寒

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-10 21:05:55
感觉是连接效率低，目的片段没有和载体连接上，长的白菌可能是假阳性的，建议你优化下连接体系（片段的纯度有要求），连接的时间长点，还有就是转化的时候做阴性对照，检测感受态细胞。。。
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14楼2015-07-10 09:14:03
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郑凤席

新虫 (小有名气)
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14楼: Originally posted by 易水秋寒 at 2015-07-10 09:14:03
感觉是连接效率低，目的片段没有和载体连接上，长的白菌可能是假阳性的，建议你优化下连接体系（片段的纯度有要求），连接的时间长点，还有就是转化的时候做阴性对照，检测感受态细胞。。。

嗯嗯 好的  谢谢！🌹🌹

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15楼2015-07-10 12:04:44
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郑凤席

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by BBMC-2012 at 2015-07-09 23:02:11
是不是转化的时候操作有啥问题？
...

我想知道，你们给我回复之后有没有收到金币啊？我用的是手机版的不懂在哪里给金币

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16楼2015-07-10 12:11:06
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 郑凤席 at 2015-07-10 12:11:06
我想知道，你们给我回复之后有没有收到金币啊？我用的是手机版的不懂在哪里给金币
...

没有啊，在回复的下面有评分？

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17楼2015-07-10 12:28:16
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郑凤席

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by BBMC-2012 at 2015-07-10 12:28:16
没有啊，在回复的下面有评分？
...

是红花吗？
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18楼2015-07-10 15:31:50
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郑凤席

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Look_2014 at 2015-07-09 10:55:25
原因可能有很多，1.目的片段回收质量   2.连接体系（目的片段与载体的比例有要求）3.连接条件  你自己慢慢尝试，祝好运

我本打算给你多几个金币的  可系统只能一个。。。。
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19楼2015-07-10 15:59:58
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郑凤席

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by BBMC-2012 at 2015-07-09 16:34:41
你放冰箱两三个小时后看看，怀疑你的感受态有问题！

无法给你评分。送金币。。。不懂为啥
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20楼2015-07-10 16:00:59
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