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qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] TA克隆相关问题 已有8人参与

PCR产物用PMD 19T载体  16℃过夜连接后,与DH5感受态细胞转化,涂平板,挑菌,液体培养基培养后,菌液变浑浊,然后做了菌落PCR有目的条带,送公司测序,公司说菌落浓度太低,这是为什么?是我感受态的问题吗
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ppppppppp

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
送测序的菌需要继续培养的,只是浑浊肯定不行,因为他们也要先抽质粒再测序的。菌落pcr和测序对菌浓度要求应该不一样的。
初来乍到,请多指教
4楼2015-07-05 14:56:56
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qaz139687: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-07-06 16:02:13
换家公司吧,如果可以的话,菌溶度不够他们不会摇啊
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
8楼2015-07-06 07:49:14
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普通回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)

来个人指点指点啊
2楼2015-07-05 13:25:08
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与,应助指数 +1
公司可以帮你转化了之后再抽提质粒测序的,估计是他们不愿意
3楼2015-07-05 14:42:12
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ppppppppp at 2015-07-05 14:56:56
送测序的菌需要继续培养的,只是浑浊肯定不行,因为他们也要先抽质粒再测序的。菌落pcr和测序对菌浓度要求应该不一样的。

我培养了5h后,做完菌落PCR就送去测序了,不是说摇菌太久的话会细菌死亡或者是amp会失效?请问下摇菌的话摇多少小时后送测比较好,之前一次摇了24个小时,公司说我的细菌都不长,说我摇太久了。另外菌液送公司的话,公司不是也会培养的嘛
5楼2015-07-05 19:24:19
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by a13515517892 at 2015-07-05 14:42:12
公司可以帮你转化了之后再抽提质粒测序的,估计是他们不愿意

你的意思是可以送PCR产物,让他们帮忙连接转化摇菌在提质粒吗
6楼2015-07-05 19:52:56
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
qaz139687: 金币+1, 有帮助 2015-07-06 16:01:51
引用回帖:
5楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-07-05 19:24:19
我培养了5h后,做完菌落PCR就送去测序了,不是说摇菌太久的话会细菌死亡或者是amp会失效?请问下摇菌的话摇多少小时后送测比较好,之前一次摇了24个小时,公司说我的细菌都不长,说我摇太久了。另外菌液送公司的话 ...

12-18小时之间吧,24太长,5小时又太短了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2015-07-05 20:56:35
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小爷不狂91

禁虫 (著名写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

9楼2015-07-06 08:12:15
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 小爷不狂91 at 2015-07-06 08:12:15
你怎么想的呢,到了这一步,你还用未纯化的pcr产物干嘛?如果你的菌液长起来了,直接取600~1000ul送公司测序,他们会提取质粒的,实在不放心,自己提取质粒做了验证有目的基因送质粒去测序,毕竟公司工作的都是本科 ...

可能是我描述有问题,我是做完菌液PCR后,有条带,送的是菌液,不是PCR产物。。
10楼2015-07-06 15:59:48
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