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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆相关问题
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qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] TA克隆相关问题 已有8人参与

PCR产物用PMD 19T载体  16℃过夜连接后，与DH5感受态细胞转化，涂平板，挑菌，液体培养基培养后，菌液变浑浊，然后做了菌落PCR有目的条带，送公司测序，公司说菌落浓度太低，这是为什么？是我感受态的问题吗
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1楼 2015-07-04 23:14:09
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
公司可以帮你转化了之后再抽提质粒测序的，估计是他们不愿意
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3楼2015-07-05 14:42:12
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qaz139687

新虫 (小有名气)
来个人指点指点啊
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2楼2015-07-05 13:25:08
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ppppppppp

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
送测序的菌需要继续培养的，只是浑浊肯定不行，因为他们也要先抽质粒再测序的。菌落pcr和测序对菌浓度要求应该不一样的。
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初来乍到，请多指教
4楼2015-07-05 14:56:56
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ppppppppp at 2015-07-05 14:56:56
送测序的菌需要继续培养的，只是浑浊肯定不行，因为他们也要先抽质粒再测序的。菌落pcr和测序对菌浓度要求应该不一样的。

我培养了5h后，做完菌落PCR就送去测序了，不是说摇菌太久的话会细菌死亡或者是amp会失效？请问下摇菌的话摇多少小时后送测比较好，之前一次摇了24个小时，公司说我的细菌都不长，说我摇太久了。另外菌液送公司的话，公司不是也会培养的嘛
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5楼2015-07-05 19:24:19
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