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qaz139687

新虫 (小有名气)

[求助] TA克隆相关问题 已有8人参与

PCR产物用PMD 19T载体  16℃过夜连接后,与DH5感受态细胞转化,涂平板,挑菌,液体培养基培养后,菌液变浑浊,然后做了菌落PCR有目的条带,送公司测序,公司说菌落浓度太低,这是为什么?是我感受态的问题吗
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与,应助指数 +1
公司可以帮你转化了之后再抽提质粒测序的,估计是他们不愿意
3楼2015-07-05 14:42:12
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查看全部 19 个回答

qaz139687

新虫 (小有名气)

来个人指点指点啊
2楼2015-07-05 13:25:08
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ppppppppp

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
送测序的菌需要继续培养的,只是浑浊肯定不行,因为他们也要先抽质粒再测序的。菌落pcr和测序对菌浓度要求应该不一样的。
初来乍到,请多指教
4楼2015-07-05 14:56:56
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ppppppppp at 2015-07-05 14:56:56
送测序的菌需要继续培养的,只是浑浊肯定不行,因为他们也要先抽质粒再测序的。菌落pcr和测序对菌浓度要求应该不一样的。

我培养了5h后,做完菌落PCR就送去测序了,不是说摇菌太久的话会细菌死亡或者是amp会失效?请问下摇菌的话摇多少小时后送测比较好,之前一次摇了24个小时,公司说我的细菌都不长,说我摇太久了。另外菌液送公司的话,公司不是也会培养的嘛
5楼2015-07-05 19:24:19
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