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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助大家用过的最长的引物是多长？
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lizhankun22

银虫 (小有名气)

[求助] 求助大家用过的最长的引物是多长？已有9人参与

最近在做一个点突的构建，最后一步的引物是260bp，做了两次都没有成功，请问各位这么长的引物需要注意什么。thank you~
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1楼2015-06-23 10:04:34
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1 2015-06-23 21:59:53
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3楼2015-06-23 11:12:16
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喜欢吃干果

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 21:59:33
可以用重叠PCR加入点突变，你这种方法比较难整
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2楼2015-06-23 10:40:22
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有这么长的引物，你最好分步来做。
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4楼2015-06-23 14:05:06
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hanyu426980

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 22:00:27
我师姐也是做点突变，引物大概30到40nt就好了，引物设计的时候上下游引物有同源区，且突变位置在同源区就好了。应该是直接PCR带基因的载体吧。
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5楼2015-06-23 15:06:06
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