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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助大家用过的最长的引物是多长？
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lizhankun22

银虫 (小有名气)

[求助] 求助大家用过的最长的引物是多长？已有9人参与

最近在做一个点突的构建，最后一步的引物是260bp，做了两次都没有成功，请问各位这么长的引物需要注意什么。thank you~
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1楼2015-06-23 10:04:34
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喜欢吃干果

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 21:59:33
可以用重叠PCR加入点突变，你这种方法比较难整
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2楼2015-06-23 10:40:22
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1 2015-06-23 21:59:53
本帖内容被屏蔽
3楼2015-06-23 11:12:16
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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没有这么长的引物，你最好分步来做。
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123456
4楼2015-06-23 14:05:06
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hanyu426980

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 22:00:27
我师姐也是做点突变，引物大概30到40nt就好了，引物设计的时候上下游引物有同源区，且突变位置在同源区就好了。应该是直接PCR带基因的载体吧。
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5楼2015-06-23 15:06:06
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 22:00:45
50bp左右，Tm在65左右就可以了。做个点突变哪用这么大的引物。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
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大家相互帮助哈
6楼2015-06-23 17:57:31
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zebei

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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建议不要超过70bp
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7楼2015-06-23 21:33:08
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易水秋寒

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
反向PCR可以引入点突变，引物长度在25nt左右，
或者利用同源性引物点突变，引物长度在40nt左右。
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8楼2015-06-24 09:15:21
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我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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那么长，你这是要干什么啊啊啊啊
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9楼2015-06-24 09:41:42
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10386com

新虫 (正式写手)
不知你用来干啥的，我这边有一些现成引物，不想自己合成的可以说具体点
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10楼2015-06-24 09:50:08
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