24小时热门版块排行榜    

查看: 8878  |  回复: 10

lizhankun22

银虫 (小有名气)

[求助] 求助大家用过的最长的引物是多长? 已有9人参与

最近在做一个点突的构建,最后一步的引物是260bp,做了两次都没有成功,请问各位这么长的引物需要注意什么。thank you~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

喜欢吃干果

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 21:59:33
可以用重叠PCR加入点突变,你这种方法比较难整
2楼2015-06-23 10:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mataomatao

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1 2015-06-23 21:59:53
本帖内容被屏蔽

3楼2015-06-23 11:12:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有这么长的引物,你最好分步来做。
123456
4楼2015-06-23 14:05:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanyu426980

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 22:00:27
我师姐也是做点突变,引物大概30到40nt就好了,引物设计的时候上下游引物有同源区,且突变位置在同源区就好了。应该是直接PCR带基因的载体吧。
5楼2015-06-23 15:06:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 22:00:45
50bp左右,Tm在65左右就可以了。做个点突变哪用这么大的引物。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
大家相互帮助哈
6楼2015-06-23 17:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zebei

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议不要超过70bp
7楼2015-06-23 21:33:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

易水秋寒

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
反向PCR可以引入点突变,引物长度在25nt左右,
或者利用同源性引物点突变,引物长度在40nt左右。
8楼2015-06-24 09:15:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那么长,你这是要干什么啊啊啊啊
9楼2015-06-24 09:41:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

10386com

新虫 (正式写手)


不知你用来干啥的,我这边有一些现成引物,不想自己合成的可以说具体点
10楼2015-06-24 09:50:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lizhankun22 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:15 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-17 13:39 by ObVzqQQh1rrE
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 23jxep3nCNZb 2026-09-14 5/250 2026-09-17 13:29 by ObVzqQQh1rrE
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 23jxep3nCNZb 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:29 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 23jxep3nCNZb 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:27 by ObVzqQQh1rrE
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 4/200 2026-09-17 05:50 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:04 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:28 by Tql5LQhh5rLK
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-17 01:50 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-16 21:03 by MHf40yA0Uhyb
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-16 17:27 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 16:00 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-16 14:27 by i3KBRD19ERkG
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 02:35 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
请填处理意见