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lizhankun22

银虫 (小有名气)

[求助] 求助大家用过的最长的引物是多长? 已有9人参与

最近在做一个点突的构建,最后一步的引物是260bp,做了两次都没有成功,请问各位这么长的引物需要注意什么。thank you~
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喜欢吃干果

银虫 (初入文坛)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 21:59:33
可以用重叠PCR加入点突变,你这种方法比较难整
2楼2015-06-23 10:40:22
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mataomatao

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1 2015-06-23 21:59:53
本帖内容被屏蔽

3楼2015-06-23 11:12:16
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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没有这么长的引物,你最好分步来做。
123456
4楼2015-06-23 14:05:06
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hanyu426980

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 22:00:27
我师姐也是做点突变,引物大概30到40nt就好了,引物设计的时候上下游引物有同源区,且突变位置在同源区就好了。应该是直接PCR带基因的载体吧。
5楼2015-06-23 15:06:06
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-23 22:00:45
50bp左右,Tm在65左右就可以了。做个点突变哪用这么大的引物。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
大家相互帮助哈
6楼2015-06-23 17:57:31
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zebei

新虫 (初入文坛)

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建议不要超过70bp
7楼2015-06-23 21:33:08
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易水秋寒

银虫 (初入文坛)

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反向PCR可以引入点突变,引物长度在25nt左右,
或者利用同源性引物点突变,引物长度在40nt左右。
8楼2015-06-24 09:15:21
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我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)

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那么长,你这是要干什么啊啊啊啊
9楼2015-06-24 09:41:42
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10386com

新虫 (正式写手)


不知你用来干啥的,我这边有一些现成引物,不想自己合成的可以说具体点
10楼2015-06-24 09:50:08
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