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求助打算帮我看看我的引物二聚体很亮,目的条带很暗怎么破
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xuyun618
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1楼
2015-05-05 13:18:18
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【答案】应助回帖
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晞朔: MolEPI+1
2015-05-05 15:38:45
胶浓度也做梯度?170bp的条带,用2%的胶,胶浓度不要改变。
既然对温度梯度做了摸索,没有成功,说明问题不在温度,一般扩增不出阿狸主要还是看引物的设计是否合理,看图基本小于100bp可以判断是二聚体了,你还是从引物入手吧,或者使用特异性高的酶去扩增,低温下能够抑制非特异性产物产生,我们都是用
热启动酶
或者
高保真酶
都行,同时,注意模板的纯度,操作时候的
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todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼
2015-05-05 13:47:30
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天地一微尘
铁杆木虫
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专业: 生物化学
【答案】应助回帖
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1、降低一下模板和引物的浓度。
2、用step down 来扩一下。
DMOS主要是用在GC含量高的模板扩增中,对引物二聚体作用不大。
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3楼
2015-05-05 14:10:52
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nemo88
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4楼
2015-05-05 14:18:04
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feng37ye
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【答案】应助回帖
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建议先3%的胶跑一下引物,看两引物浓度一致否(不一致不出结果),以及引物是否有问题。
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5楼
2015-05-05 16:18:12
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饿的神啊
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【答案】应助回帖
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5楼
:
Originally posted by
feng37ye
at 2015-05-05 16:18:12
建议先3%的胶跑一下引物,看两引物浓度一致否(不一致不出结果),以及引物是否有问题。
还可以直接跑引物对吗?具体怎么操作啊,就是3%的胶,然后上样什么的都和普通电泳一样吗,只是DNA换成引物对。上下游放一个孔,还是分开呢?求解释
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6楼
2015-05-29 15:21:00
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feng37ye
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引用回帖:
6楼
:
Originally posted by
饿的神啊
at 2015-05-29 15:21:00
还可以直接跑引物对吗?具体怎么操作啊,就是3%的胶,然后上样什么的都和普通电泳一样吗,只是DNA换成引物对。上下游放一个孔,还是分开呢?求解释
...
不好意思。正常跑电泳久就可以,一个引物一个空,marker用小一点的,引物在50bp一下
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼
2015-06-01 14:45:24
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