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xuyun618

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2015-05-05 13:18:18
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
晞朔: MolEPI+1 2015-05-05 15:38:45
胶浓度也做梯度？170bp的条带，用2%的胶，胶浓度不要改变。
既然对温度梯度做了摸索，没有成功，说明问题不在温度，一般扩增不出阿狸主要还是看引物的设计是否合理，看图基本小于100bp可以判断是二聚体了，你还是从引物入手吧，或者使用特异性高的酶去扩增，低温下能够抑制非特异性产物产生，我们都是用热启动酶或者高保真酶都行，同时，注意模板的纯度，操作时候的
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-05-05 13:47:30
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普通回帖

天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、降低一下模板和引物的浓度。
2、用step down 来扩一下。
DMOS主要是用在GC含量高的模板扩增中，对引物二聚体作用不大。
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3楼2015-05-05 14:10:52
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nemo88

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2015-05-05 14:18:04
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feng37ye

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议先3%的胶跑一下引物，看两引物浓度一致否（不一致不出结果），以及引物是否有问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-05-05 16:18:12
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饿的神啊

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by feng37ye at 2015-05-05 16:18:12
建议先3%的胶跑一下引物，看两引物浓度一致否（不一致不出结果），以及引物是否有问题。

还可以直接跑引物对吗？具体怎么操作啊，就是3%的胶，然后上样什么的都和普通电泳一样吗，只是DNA换成引物对。上下游放一个孔，还是分开呢？求解释
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6楼2015-05-29 15:21:00
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feng37ye

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2015-05-29 15:21:00
还可以直接跑引物对吗？具体怎么操作啊，就是3%的胶，然后上样什么的都和普通电泳一样吗，只是DNA换成引物对。上下游放一个孔，还是分开呢？求解释...

不好意思。正常跑电泳久就可以，一个引物一个空，marker用小一点的，引物在50bp一下

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2015-06-01 14:45:24
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