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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR总有几株菌P不出来该怎么办
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Kisaduff

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落PCR总有几株菌P不出来该怎么办 已有3人参与

各位大神好！我要对筛选出来的菌株进行16S 鉴定，所以做了菌落PCR。但是结果是，总共12株菌，只有3株有很亮的条带，其余9株都没有条带。请问这是为什么？该如何解决？我们对这些菌株做过生理检验，革兰氏阳性，怀疑为乳酸菌；已经重复P了3次，结果都是这样，那3株能P出来的每次都能P出来，其余9株一直P不出来····请问该怎么调整？
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1楼 2015-06-22 00:21:03
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luyi100

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
童鞋你好，我有一个建议：用DNA-free water稀释10倍、100倍。
我以前也有这种情况，mastermix没有问题但是一直没有band，原因是加入的template浓度太大，primer和template不能识别，导致反应失败
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2楼2015-06-24 00:54:28
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miracle8001

新虫 (小有名气)
楼主解决了么 我也遇到了相似的问题
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3楼2015-08-12 17:01:58
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aini_222925

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你都说了是革兰氏阳性菌，先提取DNA或裂解一下再去扩增试试。
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我是疯子我怕谁
4楼2015-08-13 11:28:48
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人车

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们都是G-用菌落PCR的 G+都是提取基因组之后在进行PCR 你就是要16S鉴定吗？
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5楼2015-08-13 14:22:08
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