24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

SDAUWY

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 141
帖子: 3
在线: 3.2小时
虫号: 2124788
注册: 2012-11-13
性别: GG
专业: 昆虫学

[求助] 分子新手，PCR产物回收浓度太低，请教各位虫友！已有6人参与

本人刚开始接触分子方面的试验，准备做RNA干扰，目前正用带T7的引物跑PCR，产物带挺亮，然后用天根的试剂盒切胶回收的浓度太低，一般都在30ng/μl左右。我后续要用这个回收产物做模板走promega T7BiboMAX Express RNAi System 这个试剂盒的程序，要求模板量在1 μg，但我的回收产物远不够这个量，请教各位虫友怎么提高回收产物的量，或者有做过这个的我想请教下整个过程，非常感谢！

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物知识

蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

急！！请做过体内药物分析的虫友进来看看！！！已经有10人回复
各位虫友能帮忙分析下我提取的果实RNA问题可能出在哪吗？已经有30人回复
各位虫友们，小弟想问一下我这个核磁氢谱咋回事，不太会分析已经有5人回复
消除催化零回复，感谢虫友来交流(十二）已经有19人回复
想与各位虫友交流一下job's plot的相关问题已经有13人回复
提取的土壤中的DNA浓度低，纯度也很低怎么改善一下？已经有11人回复
做普通的实时定量PCR需要那些试剂？跪求懂行的虫友指教已经有3人回复
求助：pcr 10微升体系跑出条带很亮，50微升体系跑不出东西已经有4人回复
PCR结果不好，胶回收后浓度很低已经有10人回复
DNA浓度太低怎么办已经有6人回复
各位虫友，我想问下:分子轨道理论包括:简单分子轨道理论（定域分子轨道理论）和离域已经有4人回复
请高手帮忙分析一下这个PCR产物凝胶电泳图已经有5人回复
载体双酶切后，胶回收的效率极低，胶回收试剂盒正常，双酶切后的电泳图也正常，已经有13人回复
关于PCR引物中加入酶切位点的设计方法和酶切问题！新手，求帮忙！！已经有4人回复
PCR产物双酶切遇到问题，求救！！！已经有7人回复
如何浓缩PCR产物？已经有7人回复
各种综合问题：酶切胶回收质粒浓缩测浓度已经有7人回复
pcr产物胶回收浓度低，能不能和T载体连接已经有16人回复
rt-pcr电泳图，求好心虫友帮助分析一下，跪谢。。。已经有14人回复
PCR产物再进行PCR 已经有19人回复
新提的质粒DNA，关于浓度和纯度虫友们发表一些看法吧已经有32人回复
PCR产物回收之后跑胶浓度过低已经有17人回复
天根公司的Long Taq DNA Polymerase的PCR扩增产物是平末端还是带A尾巴？已经有8人回复
【求助/交流】连接产物电泳已经有17人回复
【求助/交流】（5.20更新）PCR产物电泳没有条带，why? 已经有20人回复

1楼 2015-06-17 22:30:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

SDAUWY

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 141
帖子: 3
在线: 3.2小时
虫号: 2124788
注册: 2012-11-13
性别: GG
专业: 昆虫学

引用回帖:

8楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-06-19 20:37:43
我之前做过RNAi实验，刚开始也和你一样，DNA模板浓度低上不去，没法合成RNA，后来试了很多种方法，给你介绍一下：
1、如上面虫友所说，多做几个PCR重复，我50uL反应体系做了5个重复，最后会收到一起，20uL水依次洗 ...

谢谢！我准备试一下你的方法。不知道能否留下你的联系方式，还有很多问题想要求教！谢谢！