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SDAUWY

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子新手,PCR产物回收浓度太低,请教各位虫友! 已有6人参与

本人刚开始接触分子方面的试验,准备做RNA干扰,目前正用带T7的引物跑PCR,产物带挺亮,然后用天根的试剂盒切胶回收的浓度太低,一般都在30ng/μl左右。我后续要用这个回收产物做模板走promega T7BiboMAX Express RNAi System 这个试剂盒的程序,要求模板量在1 μg,但我的回收产物远不够这个量,请教各位虫友怎么提高回收产物的量,或者有做过这个的我想请教下整个过程,非常感谢!
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SDAUWY

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-06-19 20:37:43
我之前做过RNAi实验,刚开始也和你一样,DNA模板浓度低上不去,没法合成RNA,后来试了很多种方法,给你介绍一下:
1、如上面虫友所说,多做几个PCR重复,我50uL反应体系做了5个重复,最后会收到一起,20uL水依次洗 ...

谢谢!我准备试一下你的方法。不知道能否留下你的联系方式,还有很多问题想要求教!谢谢!
9楼2015-06-22 14:28:16
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博克侬浮码

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
SDAUWY(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:41:09
多扩几管PCR,在回收过柱子的时候把离心后的液体再过一遍柱子,洗脱时也是,洗脱两次,加的洗脱液量不要太大,我这样做回收的时候浓度在100-300ng/ul左右
2楼2015-06-18 10:36:19
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doudou_32

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
SDAUWY(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:41:17
如果你跑出来的带是单一一条带,可以试试PCR产物回收试剂盒,回收效率会高一些。
3楼2015-06-18 11:03:24
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SDAUWY

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 博克侬浮码 at 2015-06-18 10:36:19
多扩几管PCR,在回收过柱子的时候把离心后的液体再过一遍柱子,洗脱时也是,洗脱两次,加的洗脱液量不要太大,我这样做回收的时候浓度在100-300ng/ul左右

谢谢,我再试试,今天刚跑的PCR产物有500-600的浓度,按你的说法做做试试看能回收到多少
4楼2015-06-18 15:54:09
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